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任何原因引起的坐骨神经损伤都能造成脊髓运动神经元变性或死亡,神经损伤后能相继引起神经营养因子代谢紊乱。目前临床治疗周围神经损伤的方法很多,本项研究是在以前的基础上对周围神经进行脱细胞处理,制备脱细胞神经基质移植物。建立脱细胞神经基质移植物修复坐骨神经缺损模型,通过组织学、免疫组织化学染色、免疫荧光和Western Blot检测NeuN和生长相关蛋白-43在相应脊髓节段的表达,观察GAP-43和NeuN在神经再生和轴突生长中的变化。探讨脱细胞神经基质移植物对脊髓前角运动神经元的保护作用。
材料和方法：
1、化学萃取脱细胞方法制备脱细胞神经基质移植物；
选用Wistar大鼠10只,麻醉后取出双侧坐骨神经,采用化学萃取方法制备脱细胞神经基质移植物。制备的脱细胞大鼠坐骨神经置于含100ug/ml庆大霉素和100ug/ml链霉素的PBS(PH7.4)液中,4℃下保存备用。
2、实验动物和分组；
成年健康Wistar大鼠30只,体重200～250g,由中国医科大学实验动物部提供。随机分为三组,正常组,实验组(脱细胞移植物桥接坐骨神经缺损组),对照组(坐骨神经缺损组),每组10只。
3、取材和检测；
动物饲养15天和1个月后,取各组相应节段脊髓(L4-L6节段),进行免疫荧光、免疫组织化学染色和Western Blot,检测NeuN、GAP-43在脊髓内的表达。
实验结果：
1、在脊髓前角运动神经元内NeuN的表达:NeuN阳性神经元在术后一个月的对照组中减少,同时实验组中的NeuN阳性神经元增多.脊髓前角NeuN阳性神经元在实验组移植侧(9.43±1.63)与正常组(14.40±1.81)间以及实验组移植侧与对照组缺损侧(5.97±1.69)比较,差异均有显著性(P＜0.05).
2、GAP-43免疫组织化学染色结果显示:光镜下清晰可见脊髓GAP-43阳性的运动神经元胞体及其突起染成棕黄色,胞核不着色。正常组偶见阳性染色,对照组和实验组在术后15天后阳性细胞较多,染色深。30天后两组的GAP-43的表达比15天低,而实验组比对照组的GAP-43的表达明显增高。
3、Western Blot结果显示:对照组和实验组15天后GAP-43的阳性反应条带明显加深,比正常组表达明显增高(**P＜0.01),30天后仍维持较高水平,与正常组相比有显著性增高(*P＜0.05).30天后实验组比对照组的GAP-43表达明显增高(＃P＜0.05)。
结论：
1、脱细胞神经基质移植物修复坐骨神经缺损后脊髓前角运动神经元NeuN表达增高表明脱细胞神经基质移植物能够对脊髓运动神经元有保护作用。
2、应用脱细胞神经基质移植物修复坐骨神经损伤,可以通过增加GAP-43在脊髓内的表达对脊髓运动神经元有保护效果并促进周围神经再生。