拟南芥赤霉素受体基因克隆和转化研究

来源 :厦门大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:jht20007
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目前已发现的调控植物开花过程的分子遗传学途径主要有四个:春化途径、光周期途径、自主开花途径与赤霉素途径。赤霉素信号转导途径控制着一系列的生长发育过程,调控开花时间是其重要功能之一。目前已有相关报道表明各个信号转导途径间可能存在复杂的对话机制,进而影响植物的发育与开花时间。为了进一步研究赤霉素信号转导与其它开花途径之间的相互作用及对开花时间的影响,我们克隆了赤霉素三个受体基因,并构建了与HA融合的超表达载体。本研究得到的转基因材料为进一步研究拟南芥中赤霉素信号转导途径与其它信号途径间的对话机制提供了基础。本实验从植株中提取总RNA,经逆转录合成cDNA第一条链,再以cDNA第一条链为模板,通过PCR技术扩增目的基因。同时我们利用Gateway克隆系统,将目的基因导入入门载体,经过测序鉴定得到正确的目的基因片段,再通过特异性重组将目的基因克隆到表达载体PK2GW7-HA中。通过农杆菌(Agrobacterium tumefacieus)转化哥伦比亚野生型拟南芥植株中。通过抗性培养基筛选获得纯合的株系,再利用荧光定量PCR技术筛选表达水平高的株系。通过与野生型表型观察比较,发现转基因植株叶偏淡绿,节间较长。
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