葛根素、栀子苷、黄芩苷、柚皮苷都是临床常用中草药的主要成分,在现代药物制剂中得到了广泛的应用,其药理活性及作用靶点都是中医药领域的研究热点。临床研究证明,葛根素具有提高免疫,增强心肌收缩力,保护心肌细胞,降低血压,抗血小板聚集、降血糖、降血脂等作用；栀子苷具有解热、镇痛、镇静、利胆、护肝、抗微生物、抗血栓、抗炎、治疗软组织损伤、抑制诱变等作用；黄芩苷具有具有抑菌、利尿、抗炎、抗变态、解痉、利胆、抗癌等作用；柚皮苷具有止咳化痰、抗炎、抗病毒、抗癌、抗突变、抗过敏、抗溃疡、镇痛、降血压、减少血栓的形成,改善局部微循环和营养供给等作用。葛根素、栀子苷、黄芩苷、柚皮苷四种物质都属于中药小分子,中药小分子的分析有分光光度、薄层色谱法、毛细管电泳法、库仑滴定法、高效液相色谱法等,目前以上四种物质的分析主要采用HPLC方法,该方法虽然准确可靠,但用于大量样品的检测时,耗时较长,尤其是在进行体内代谢和组织分布研究时,需要对微量生物样品如小鼠的海马、脑脊液等进行较复杂的前处理程序,以除去其中的蛋白类等大分子物质,导致难以获得满意的结果,甚至无法测定。免疫分析法是一种以抗原与抗体的特异性、可逆性结合反应为基础的分析方法,这种方法前处理极其简单甚至不需要经过任何前处理,直接可以进行测定,并且特异性强、灵敏度高、方便快捷、分析成本低、安全可靠、对微量生物样品具有显见的优势。目的：建立葛根素、栀子苷、黄芩苷、柚皮苷含量测定的HPLC方法和间接竞争ELISA方法,通过比较HPLC方法和间接竞争ELISA方法测定相关药品中葛根素、栀子苷、黄芩苷、柚皮苷含量的相关性,确认间接竞争ELISA方法在含量检测中的可靠性,以用于日后的研究过程中微量生物样品中葛根素、栀子苷、黄芩苷、柚皮苷的含量分析。方法：建立葛根素、栀子苷、黄芩苷、柚皮苷含量测定的HPLC方法,其中葛根素色谱条件为色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6×150mm,5μm),流动相：甲醇：水=25：75(V/V),检测波长：250nm,柱温：25℃,流速：1.0ml/min,进样量：10μl；栀子苷色谱条件为色谱柱：Phenomenex Gemini C18(4.6×250mm,5μm),流动相：乙腈：水=25：75(V/V),检测波长：238nm,柱温：25℃,流速：1.0ml/min,进样量：10μl。黄芩苷色谱条件为：色谱柱：Phenomenex Gemini C18(4.6×250mm,5μm),流动相：乙腈：1%磷酸=20：80(V/V),检测波长：276nm,柱温：25℃,流速：1.0ml/min,进样量：10μl.柚皮苷色谱条件为：色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6×150mm,5μm),流动相：乙腈：0.05%磷酸=20：80(V/V),检测波长：250nm,柱温：25℃,流速：1.0ml/min,进样量：10μl。对各方法进行方法学考察,研究标准曲线、检测范围、回收率、精密度、重现性、稳定性以确定方法切实可靠。建立葛根素、栀子苷、黄芩苷、柚皮苷含量测定的间接竞争ELISA方法,并考察该方法的线性、检测范围、板间差、孔间差、回收率。分别用间接竞争ELISA方法和HPLC方法检测含有葛根素、栀子苷、黄芩苷、柚皮苷的中成药物,对两种方法含量测定的结果进行比较,观察检测结果的相关性。结果：HPLC方法与间接竞争ELISA方法的方法学考察结果均良好,HPLC方法四种物质R2值均在0.999以上,回收率均在95%以上,精密度、重现性、稳定性RSD值均小于3%；间接竞争ELISA方法四种物质R2值均在0.9以上,平均回收率均在95%以上,板间差、孔间差均在ELISA方法可接受范围内。结论：HPLC方法和间接竞争ELISA方法测定结果一致,在检测范围内呈现良好的相关性,间接竞争ELISA方法可以用于含有葛根素、栀子苷、黄芩苷、柚皮苷的药材或复方的含量分析。间接竞争ELISA方法切实可信,这为中药小分子的含量检测提供了便利,为今后代谢等研究过程中微量生物样品中葛根素、栀子苷、黄芩苷、柚皮苷的含量分析奠定了基础。