【摘 要】
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目的:通过观察瘦素(leptin)对人近端肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的作用,探讨其与转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的关系及糖尿病肾脏病肾间质纤维化的发病机制。方法:分别用不同
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目的:通过观察瘦素(leptin)对人近端肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的作用,探讨其与转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的关系及糖尿病肾脏病肾间质纤维化的发病机制。方法:分别用不同浓度的瘦素(10、50、100ng/ml)刺激体外培养的HK-2细胞48 h,以及100ng/ml的瘦素刺激不同的时间(24、48、72 h)。倒置显微镜下观察HK-2细胞形态学变化;实时荧光定量RT-PCR法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin, a-SMA)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)和TGF-β1 mRNA的表达水平;Western印迹法检测细胞内a-SMA、E-cadherin、FN的蛋白表达水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养液上清中TGF-β1蛋白表达量。抗TGF-β1抗体中和实验分析瘦素对HK-2细胞转分化的作用与TGF-β1的关系。结果:(1)瘦素刺激可使HK-2细胞逐渐由椭圆形变成长梭形,类似肌成纤维细胞的形态;(2) RT-PCR、Western印迹法及ELISA结果表明,瘦素可以下调E-cadherin的表达,同时上调a-SMA、TGF-p,的表达,其作用有一定的剂量及时间依赖性,且a-SMA与TGF-pimRNA表达量之间呈正相关。(3)抗TGF-β1抗体中和实验结果表明,抗TGF-β1抗体能够显著降低瘦素导致的HK-2细胞表达α-SMA蛋白,同时阻止瘦素降低E-cadherin表达及增加FN合成的作用。结论:瘦素可通过诱导肾小管上皮细胞转分化,参与肾间质纤维化的发生发展,其作用机制与瘦素刺激该细胞上调TGF-β1的表达有关。
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