【摘 要】
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目的:采用11β-HSD1基因过表达小鼠,探讨姜黄素类似物H8对11β-HSD1基因过表达小鼠脂肪和分解相关酶的影响及作用机制。方法:利用分子生物学技术构建新的pLVX-EF1alpha-IRES-
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目的:采用11β-HSD1基因过表达小鼠,探讨姜黄素类似物H8对11β-HSD1基因过表达小鼠脂肪和分解相关酶的影响及作用机制。方法:利用分子生物学技术构建新的pLVX-EF1alpha-IRES-Zs Green1-Ms11β-HSD1载体,培养293T细胞并进行慢病毒转染,收集病毒液。C57BL/6雄性小鼠64只,随机分为4组:对照组、对照给药组、模型组、模型给药组。利用慢病毒载体造11β-HSD1基因过表达小鼠模型,用姜黄素类似物H8(0.5 mg·kg-1·d-1)灌胃对照组小鼠和基因过表达组小鼠2个月,每周定时测量所有实验小鼠体重和饮食量一次,实验进行2个月之后,检测小鼠胰岛素耐量及葡萄糖耐量,然后眼眦取血,检测小鼠血清中生化指标的变化:FFA、GLU、HDL、LDL、TC、TG。通过天狼星红染色、HE染色、Masson染色察看小鼠肝脏组织病理形态学变化及纤维化的变化。实时荧光定量PCR检测小鼠肝脏组织中cpt-1、acc1、hsl、acc2、fas、srebp-1的mRNA表达,并通过免疫组化方法观察相关蛋白表达量。结果:模型组小鼠体重明显高于对照组,经过H8治疗后,治疗组小鼠体重明显低于模型组小鼠体重,模型组小鼠出现明显的胰岛素抵抗,经过H8治疗后小鼠胰岛素抵抗明显减弱。模型组小鼠血清中的生化指标FFA、GLU、LDL水平与对照组相比明显升高(P<0.05,P<0.01)经过治疗后FFA、GLU、LDL明显下降(P<0.05,P<0.01),HE染色模型组肝脏发生炎症,变性坏死,细胞浸润,肝小叶结构模糊,经过H8治疗后,炎症减轻,肝小叶组织结构清晰,坏死和浸润得到明显改善。Masson和天狼星红染色模型组小鼠肝脏纤维化明显,经过H8治疗后,纤维化水平明显降低,Real-time PCR基因检测模型组肝脏hsl、acc1、fas、acc2、srebp-1的mRNA水平明显升高(P<0.05,P<0.01,P<0.001),cpt-1基因水平明显降低(P<0.01),经过H8治疗后hsl、acc1、fas、acc2、srebp-1的mRNA表达量明显降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001),cpt-1基因水平明显升高(P<0.05)。采用免疫组化法观察模型组小组ACC1、ACC2和HSL蛋白明显高于对照组,AMPK蛋白表达明显低于对照组;经过H8灌胃治疗后,ACC1、ACC2和HSL蛋白表达量明显下降,AMPK蛋白表达量明显升高。结论:小鼠11β-HSD1基因过表达,可导致脂代谢紊乱,姜黄素类似物H8能够改善11β-HSD1基因过表达小鼠脂代谢紊乱,其作用机制可能与其抑制11β-HSD1进而改善AMPK、ACC1、ACC2、CPT-1、SREBP-1、FAS、HSL基因水平和蛋白水平有关。
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