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目的通过建立大鼠双后肢肢体缺血再灌注损伤(1imb Ischemia ReperfusionInjury,LIRI)模型,观察促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)预处理对LIRI后的大鼠肝脏及肝脏微循环的保护作用。探究缺血再灌注损伤(IschemiaReperfusion Injury,IRI)后活体的大鼠肝脏微循环血流量变化、肝脏组织中内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)蛋白含量水平的区别、氧化应激(Oxidative Stress)损伤程度、肝脏组织形态变化等。探讨这一系列变化与EPO对肝脏微循环保护作用的相关性,初步证明EPO预处理在LIRI中对肝脏微循环的保护作用。方法实验用45只健康成年雄性SD大鼠,制作大鼠双后肢缺血再灌注模型。采用随机数表法将大鼠平均分为3组(n=15):对照组(Control组);缺血再灌注组(IR组);EPO预处理组(EPO+IR组)。本实验采用缺血4小时,再灌注2小时的方法。于再灌注前30min对EPO+IR组的大鼠腹腔注射重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)3000U/kg,Control组和IR组大鼠则腹腔注射等量的生理盐水。用激光多普勒活体观察各组大鼠肝脏微循环血流量改变情况;光学显微镜观察HE染色后的大鼠肝脏组织的形态变化;检测血浆中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)含量;血浆和肝脏组织中超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;免疫组织化学染色观察肝脏组织中eNOS的表达情况;蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测肝脏组织中eNOS蛋白的表达水平。结果1)激光多普勒活体观察各组大鼠肝脏微循环血流量,IR组较Control组肝脏微循环血流量明显降低,EPO+IR组肝脏微循环血流量虽也一定程度上降低,但是明显高于IR组。提示EPO预处理提高了LIRI后肝脏微循环血流量。2)HE染色观察到大鼠肝脏组织,Control组肝脏组织形态结构基本正常,IR组动物肝小叶结构紊乱,肝血窦变窄,部分肝组织出现肝血窦及中央静脉不同程度的淤血,炎细胞浸润等病理改变,EPO+IR组中各种病理改变较IR组减轻。3)与Control组相比,IR组和EPO+IR组血浆中ALT、AST水平均明显升高(P<0.01),但EPO+IR组血浆中ALT、AST水平较IR组均有所降低(P<0.01)。说明EPO预处理组的肝脏功能一定程度上得到了保护。4)与Control组相比,IR组和EPO+IR组的肝脏组织和血浆中SOD活力下降明显(P<0.01),MDA含量明显升高(P<0.05)。但EPO+IR组较IR组SOD活力升高(P<0.05),MDA含量降低(P<0.05)。提示EPO预处理减轻了脂质过氧化反应。5)肝脏免疫组织化学染色显示,IR组和EPO+IR组肝脏组织中均有eNOS蛋白棕黄色染色颗粒(P<0.01),EPO+IR组较IR组棕黄色染色更为明显(P<0.05)。6) Western blot实验发现,EPO+IR组肝脏组织中eNOS蛋白表达水平最高,其次是IR组,这两组中eNOS表达水平均高于Control组,且差异具有显著的统计学意义(P<0.01)。说明EPO在LIRI的肝脏组织中更加促进了eNOS的活化和表达。结论EPO预处理可以减轻大鼠LIR肝脏的损伤,其机制可能与减轻缺血再灌注后肝脏微循环的损伤,抑制肝脏组织内的氧化应激反应,上调eNOS在肝脏组织中的活化和表达有关。当大鼠发生LIRI时,用EPO预处理可以减轻肝脏组织的病理改变;通过提高SOD活力、降低MDA含量减轻氧化应激反应;促进eNOS的活化,上调P-eNOS的表达,相对增加肝脏微循环的血流量。从而发挥对肝脏微循环的保护作用。