油茶遗传多样性及遗传性状的RAPD分析

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应用RAPD标记技术,分析油茶杂优闽1等32个品系及10个龙眼茶农家品种的遗传多样性及杂优闽l等32个品系的果油率、单株结实量等遗传性状与RAPD标记的相关性。结果表明:(1)用改进的CTAB法提得的油茶基因组DNA分子大小约为48kb,OD260/OD280比值在1.8~2.0之间,平均得率为328 ng/mg·Fw。DNA经核酸内切酶消化,表明其质量能满足分子生物学实验的要求。(2)分别测试了Mg2+、引物、dNTP、DNA模板浓度和Taq DNA聚合酶用量对RAPD反应结果的影响,筛选并确定了油茶RAPD分析的最适反应体系:在25μ1 PCR反应体积中,含20ng模板DNA,2.5mmol/L MgCl2,0.2mmol/L dNTP,0.3μmol/L引物,1U Taq DNA聚合酶。相应的扩增程序为:94℃预变性180s;94℃变性60s,37℃退火90s,72℃延伸120s,反应40个循环;最后在72℃延伸5min。(3)用RAPD标记技术从78个随机寡核苷酸引物中筛选出19个引物,对32个油茶杂优品系及10个龙眼茶丰产农家品种计42个样本的遗传多样性进行分析。结果表明,供试的42个样本多态性条带百分率(PPB)为59.12%;各位点Shannon信息指数和Nei氏遗传多样性指数平均值分别为0.2516和0.1653;样本间的无偏遗传距离值为0.0516~0.4839,平均值为0.1780;遗传相似系数变化范围在0.6164~0.9497之间,平均值为0.8388。表明供试的42个样本遗传多样性水平较低。计算结果还表明,杂优闽1等32个品系间的遗传距离较小,平均值为0.1519,10个农家品种间的遗传距离也只有0.1570,而32个杂优品系与10个农家品种间的遗传距离则较大,达到0.2111。(4)油茶杂优闽1等32个品系以Nci氏(1978)无偏距离进行聚类分析,在0.14处分成5类(区),各区果油率平均值从高到低的排序为A>E>B>D>C。果油率较高的品系大都位于A区,果油率较低的多集中在C区,说明油茶果油率这一性状可能与RAPD标记的某些基因有连锁关系。而各品系的单株结实量与RAPD标记间无明显相关。
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