猪瘟(Classic Swine Fever，CSF)是由猪瘟病毒(Classic Swine Fever virus，CSFV)引起的一种猪的高度接触性传染疾病，被世界动物卫生组织(Office International des Epizooties，OIE)列为A类传染病之一。目前，免疫预防接种仍然是控制和根除CSF的主要手段，因此研制和正确使用安全有效疫苗仍是CSF综合防治中的中心环节。使用传统疫苗例如C-株免疫的猪群，在流行病学调查和CSF防制工作中，不能用血清学方法来区分自然感染猪群利免疫接种猪群，因此，迫切需要像DNA疫苗一类的标记疫苗来对CSF进行有效合理的控制。在前面的研究中，对基于RNA复制子表达载体的CSF DNA疫苗pSFV1CS-E2的免疫效果进行了研究，发现免疫猪后能产生CSFV的特异性的中和抗体并能抵抗强毒的攻击。为了进一步明确pSFV1CS-E2的保护作用，用较低剂量的pSFV1CS-E2、较少免疫次数免疫猪，再用CSFV石门株进行攻毒，其间观察临床症状，剖杀后观察病理解剖学变化，并取各器官用4％多聚甲醛固定，常规制作石蜡切片，苏木精-伊红(hematoxylin and eosin，HE)染色，进行组织病理学观察。制作简易的手工石蜡组织芯片，用免疫组织化学(immunohistochemistry，IHC)、原位杂交组织化学(in situ hybridization histochemistry，ISHH)及原位逆转录聚合酶链式反应(in situ reverse transcription polymerase chain reaction，ISRT-PCR)等分子病理学方法检测各器官中CSFV的分布及载量，同时对三种检测方法的敏感性进行了比较；另外还建立了一种对石蜡包埋标本中的CSFV RNA进行扩增的套式RT-PCR方法，用此方法对CSFV在各个器官中的分布进行了符合检测。临床、病理解剖及组织病理学观察发现免疫攻毒组猪只的临床表现正常、病理学变化较轻或者无变化，大部分猪只的免疫器官中淋巴细胞和淋巴滤泡的数量增加，生发中心体积增大，浆细胞数量增加；脾脏和淋巴结中的胸腺依赖区的淋巴细胞的增多；空质粒攻毒对照组则出现典型的病症甚至死亡。分子病理学检测结果表明免疫攻毒组与空质粒攻毒对照组相比CSFV抗原和基因检出率低并且分布的范围较小，三种不同的检测方法的敏感性存在差异，以ISRT-PCR方法最敏感，其次是ISHH，最后是IHC。套式RT-PCR技术检测石蜡包埋组织中的病毒RNA检测结果与其它检测方法相符合，免疫攻毒组的检出率明显的低于攻毒对照组。研究结果表明pSFV1CS-E2可以提高机体的免疫反应，抑制CSFV在猪体内增殖，保护CSFV对组织器官免受病理性损伤，对CSFV强毒攻击有一定的抵抗作用。ISRT-PCR，ISHH，IHC等分子病理学方法在敏感性上虽然存在一定差异，但均可以作为评价CSF疫苗免疫效果、研究CSFV致病机制的有效手段。建立的检测石蜡包埋组织中CSFV RNA的套式RT-PCR方法，具有良好的敏感性和稳定性，其检测结果与其它方法的检测结果一致。本研究应用病理形态学和分子病理学方法评价了CSF DNA疫苗的免疫效果，为其作为新型疫苗的可行性研究提供了理论依据，同时建立的分子病理学方法可为CSF及其它病毒病的诊断、免疫机制和发病机制的研究、疫苗免疫效果评价及疾病的回顾性分析提供技术平台。