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通过切胶回收纯化获得纯度93%的大豆β-伴球蛋白α亚基,作为抗原制备出α亚基多克隆抗体PcAb-60K-A;用生物信息学方法对α亚基抗原表位进行预测,选取其特异的抗原表位85EQDERQFPFPR95作为半抗原,进行人工合成后,分别与载体蛋白KLH和BSA偶联作为免疫抗原和包被抗原,制备出α亚基特异多克隆抗体PcAb-60K-B和单克隆抗体McAb-60K（属于轻链为κ的IgG1,效价约为67,000）;PcAb-60K-A识别β-伴球蛋白α同时,还与α′亚基产生交叉反应,而PcAb-60K-B和McAb-60K能实现对α亚基的特异识别,而与包括β-伴球蛋白α′和β亚基在内的豆粕其他蛋白没有交叉反应;以McAb-60K和合成的包被抗原为工具,建立了定量检测大豆及豆粕中α亚基的竞争酶联免疫吸附法,该方法有效检测范围在0.65-29.84 ng/mL,IC50能达到4.42 ng/mL,具有较好的准确性和可重复性。人工合成大豆致敏蛋白P34的cDNA全长序列,通过原核表达系统pET-28a （+）和His亲和层析,获得纯度超过92%的P34融合蛋白;以P34融合蛋白为抗原成功制备出P34特异多克隆抗体PcAb-P34,效价能够达到729,000,并且与豆粕中其他蛋白没有交叉反应;用P34融合蛋白和PcAb-P34建立了大豆P34蛋白的间接酶联免疫吸附法,其标准曲线R2为0.9831,在一定范围内具有较高精密度和可重复性。人工合成大豆致敏蛋白Gly m Bd 28K的cDNA全长序列,通过原核表达系统pET28a-28a （+）,表达了Gly m Bd 28K融合蛋白,经His亲和层析,获得纯度超过90%的融合蛋白;以Gly m Bd 28K融合蛋白为抗原,制备出Gly m Bd 28K特异多克隆抗体PcAb-28K,效价能够达到27,000,并且与豆粕中其他蛋白没有交叉反应;以纯化的Gly m Bd 28K融合蛋白和PcAb-28K建立了大豆Gly m Bd 28K蛋白的间接酶联免疫吸附检测法,其标准曲线R2为0.9910,在一定范围内具有一定精密性和重复性。用本研究建立的免疫检测方法检测显示,α亚基、具致敏活性的P34和Gly m Bd 28K在大豆种子中含量分别为46.8μg/mg、4.62μg/mg和2.96μg/mg;在豆粕中分别为8.9μg/mg、3.91μg/mg和1.21μg/mg。经发酵处理的豆粕中α亚基、具致敏活性的P34和Gly m Bd 28K含量都被显著降低。酿酒酵母对α亚基分解效率最高,然后是产朊假丝酵母、扣囊拟内孢霉、白地霉和枯草芽孢杆菌;产朊假丝酵母和酿酒酵母对P34发酵脱敏效率最高,然后是扣囊拟内孢霉、白地霉和枯草芽孢杆菌,酿酒酵母、产朊假丝酵母和扣囊拟内孢霉发酵72 h豆粕中都未检出P34蛋白;产朊假丝酵母和酿酒酵母对Gly m Bd 28K脱敏效果最好,然后是扣囊拟内孢霉、白地霉和枯草芽孢杆菌,这5种菌发酵72 h豆粕中都未检出具致敏活性的Gly m Bd 28K。此外,本研究还用人工合成的大豆球蛋白A1a和A3酸性多肽基因序列,分别构建了原核表达载体pET30a-A1a和pET30a-A3,经0.8 mmol/L的IPTG诱导5 h,A1a和A3表达量最大;His亲和层析,获得了纯度达到90%的A1a融合蛋白和91%的A3融合蛋白,并且都具有免疫活性,为大豆球蛋白免疫检测方法的建立做好了准备,为从亚基水平上进一步研究大豆球蛋白致敏机理奠定了初步基础。