四种甘草黄酮诱导HL-60细胞凋亡作用研究

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目的:测定四种甘草黄酮类化合物异甘草素、甘草素、异甘草苷、甘草苷的体外抗氧化活性,观察四种化合物对人急性早幼粒白血病细胞株 HL-60的增殖抑制和诱导凋亡作用,同时测定细胞内活性氧的变化。   方法:采用化学方法测定四种化合物对羟自由基、DPPH、超氧阴离子的清除率及脂质过氧化的抑制率,评价其抗氧化活性。MTT(甲基噻唑基四唑)法确定四种化合物对 HL-60细胞的半数抑制浓度 IC50;台盘兰拒染法测定四种化合物对HL-60细胞的致死率;AO/EB(吖啶橙/溴乙啶染料)染色观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡率。荧光探针 DCFH-DA 测定细胞内活性氧(iROS);荧光探针 DHE检测细胞内超氧阴离子水平;分光光度法测定GSH/GSSG的比率。   结果:四种化合物都具有一定的抗氧化活性,但其抗氧化能力强弱不同:对DPPH和超氧阴离子的清除能力从大到小依次为异甘草苷,异甘草素,甘草素,甘草苷;对羟自由基和卵黄脂质过氧化的抑制能力从大到小依次为异甘草素,异甘草苷,甘草素,甘草苷。通过对细胞活力、细胞形态学观察、凋亡率的检测,证实异甘草素明显对 HL-60细胞具有增殖抑制作用,并在一定作用浓度下(四种化合物在各自的IC50值和相同的摩尔浓度80μmol/L的作用下)可诱导 HL-60细胞发生凋亡现象,细胞形态发生明显变化,而其它三种化合物相同浓度下作用不显著。异甘草素可显著影响细胞内活性氧(ROS)水平,比其它三种化合物作用明显,同时与细胞内超氧阴离子的增加和GSH/GSSG比值的降低这一趋势是一致的。   结论:比较四种化合物的药理作用,异甘草素的抗氧化活性和抗肿瘤活性都比较明显;抗氧化活性方面异甘草苷与异甘草素都具有较强活性,甘草素和甘草苷次之;抗肿瘤方面异甘草素大于甘草素,异甘草苷和甘草苷则较弱;这可能与它们的结构有关。异甘草素具有显著抗氧化作用,能够抑制 HL-60细胞增殖及诱导凋亡,其作用机制可能与细胞内 ROS的水平有关。异甘草素有望成为一种治疗白血病的药物。   意义:为开发甘草黄酮化合物抗肿瘤药物提供一定的科学依据,也为深入阐明甘草黄酮抗肿瘤作用的分子机理提供科学依据,更可为甘草黄酮类抗肿瘤药物应用于白血病的治疗提供前期基础实验资料。
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