孕酮、干扰素-τ对牛子宫内膜细胞基质金属蛋白酶-2及其抑制剂-2表达的影响

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以处于黄体期的黄牛子宫为材料,用组织块法和胰蛋白酶消化法在体外培养子宫内膜原代细胞,对这两种方法进行比较,并将细胞传代,采用实时荧光定量PCR研究了孕酮(Progesterone,P)和干扰素-τ(Interferon-τ,IFN-τ)对黄牛子宫内膜细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其组织抑制剂-2(TIMP-2)mRNA表达的影响。结果如下:采用组织块培养法和胰蛋白酶消化法对子宫内膜细胞进行体外培养,均能培养出子宫内膜的混合细胞,组织块培养法培养的成功率(72.7%)高于胰蛋白酶消化法(33.3%)。传代后,两种方法培养出的细胞生长方式及形态特点无明显差异,都以间质细胞为主,可为进一步研究胚胎附植提供实验模型。孕酮和干扰素-τ对黄牛子宫内膜细胞MMP-2和TIMP-2 mRNA的表达有调节作用。孕酮(200nM)对MMP-2mRNA的表达具有促进作用,对TIMP-2 mRNA的表达具有抑制作用;干扰素-τ(100ng/ml)对MMP-2mRNA的表达具有促进作用,对TIMP-2的表达有明显的抑制作用(P>0.05);同时添加孕酮和干扰素-τ对MMP-2mRAN的表达的抑制作用,与对照组相比差异不显著(P>0.05),对TIMP-2mRAN的表达有明显的抑制作用。孕酮处理组对MMP-2 mRNA的表达的促进作用比干扰素-τ处理组明显,同时添加孕酮和干扰素-τ对MMP-2 mRNA的表达有抑制作用;孕酮处理组、干扰素-τ处理组和同时添加孕酮和干扰素-τ的处理组对TIMP-2mRNA的表达都有抑制作用,但三个处理间组差异不显著。比较不同的激素及其培养不同的时间的处理组发现,添加孕酮培养24h时MMP-2mRNA表达量最高;同时添加孕酮和干扰素-τ培养6h时TIMP-2mRNA表达量最低。MMP-2mRNA相对表达量与添加孕酮培养的时间存在极显著正相关(R~2=0.914,P<0.01);与添加干扰素-τ培养的时间和同时添加孕酮、干扰素-τ共培养的时间有一定的正相关性,差异显著(P<0.05)。TIMP-2mRNA相对表达量与添加孕酮培养的时间、干扰素-τ培养的时间,以及同时添加孕酮、干扰素-τ共培养的时间存在极显著正相关(R~2=0.901,P<0.01)。
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