由柑橘黄化脉明病毒（Citrusyellow vein clearing virus，CYVCV）引起的柑橘黄脉病是威胁柑橘生产的一种重要病害，该病主要为害柠檬和酸橙等柑橘品种。该病在巴基斯坦、印度、土耳其等国均有发生报道，在我国四川、重庆等地也有发现，其中以四川安岳柠檬主产区受害最为严重。多数寄主植株感染 CYVCV后存在隐症现象，且CYVCV可通过绣线菊蚜（Aphis spiraecola）和豆蚜（A.craccivora）在豆科植株间，以及从柠檬到豆科植株间进行传播，在柑橘与柑橘植株间的传播很可能也存在昆虫媒介，具有大面积传播流行风险，建立简便、快速、准确的检测方法对于CYVCV的监测、防治以及减少橘农损失都具有极其重要意义。因此，本文原核表达CYVCV外壳蛋白，制备CYVCV抗体，建立了CYVCV的DTBIA检测方法，并对CYVCV胶体金免疫检测试纸条进行了初步研制，以期为CYVCV的快速检测和大田实时监测提供技术支撑。所获得的主要研究结果如下：　　1、CYVCV外壳蛋白基因原核表达及抗体制备：　　依据CYVCV外壳蛋白基因CP序列设计CP基因特异性扩增引物（CP-F/R），以感病植株的总RNA为模板进行一步法RT-PCR扩增，得到一条与CP基因大小一致的特异性条带。将RT-PCR产物纯化回收后与pMD19-T载体连接，重组质粒pMD19-T-CP转化大肠杆菌JM109，后进行单克隆的测序验证。结果显示，克隆序列与GenBank已报道的柑橘黄化脉明病毒CP序列（序列号，KP3132421）一致性达99％，为目标序列。　　将目标序列与 pET16b连接，构建pET16b-CP重组表达载体，将重组表达载体转化大肠杆菌Rosetta，IPTG诱导重组表达菌表达目的蛋白，表达菌液经超声破碎分别回收上清和沉淀，经SDS-PAGE电泳发现，菌液沉淀样品中有大小40 kD的特异性条带，与CP蛋白重组表达的预期大小相符，说明重组蛋白以包涵体形式表达。对重组蛋白进行纯化，后以其为抗原免疫鼠制备CYVCV外壳蛋白多克隆抗体，通过ELISA测定抗体效价，Western Blotting验证抗体特异性。结果显示，CYVCV多克隆抗体的ELISA检测效价为1:800；Western Blotting验证抗体特异性较好。　　2、CVYCV DTBIA检测方法的建立：　　通过柑橘黄化脉明病毒（CYVCV）兔源多克隆抗体（一抗）及Ap羊抗兔标记 IgG（二抗）最佳稀释度等条件优化建立了CYVCV直接组织点免疫检测方法（Direct tissue blot immunoassay，DTBIA），并对其特异性、稳定性和检测效果进行了评价。试验结果显示，一抗、二抗稀释比例分别为1:8000和1:2000时，DTBIA检测CYVCV效果最佳；应用所建立的DTBIA方法对携带9种不同柑橘病害的柑橘样品进行检测时，仅携带 CYVCV样品呈阳性反应；柑橘黄脉病样品植物组织印迹后，印迹膜于4℃保存，90 d内可进行有效的CYVCV检测；对田间不同柑橘品种利用DTBIA法检测CYVCV，其结果与一步法RT-PCR符合率为97.92%。可见，该CYVCV检测方法快速、简便、稳定、特异及可靠，可推广应用于田间快速检测CYVCV，对于防范柑橘黄化脉明病毒大面积传播流行具有重要的现实意义。　　3、CYVCV胶体金免疫检测试纸条的研制：　　通过柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液，经目视观察、紫外扫描、电镜观察测定所制胶体金颗粒直径大小为25nm，胶体金溶液中金颗粒大小均匀，质量较好。优化了CYVCV单克隆抗体及多克隆抗体的胶体金标记条件：胶体金标记CYVCV单抗的最佳pH值为6.4，标记CYVCV多抗的最佳pH值为6.7；单抗、多抗最佳标记量均为每100μL胶体金溶液加入100μL稀释度为1:100的抗体溶液。　　制备组装四种用于CYVCV检测的胶体金免疫试纸条（多抗金标垫-多抗检测线；多抗金标垫-单抗检测线；单抗金标垫-多抗检测线；单抗金标垫-单抗检测线）对不同方法制备的植物样品进行检测，发现以CBS和PBS缓冲液抽取的植物样品不能达到检测要求，检测线均无颜色反应；而检测以尿素法提取的植物样品出现假阳性现象。对假阳性现象进行多种讨论试验，质控线均能稳定显色，但假阳性现象仍不能消除。CYVCV胶体金免疫层析试纸条检测体系仍需要进一步研究。