研究背景及目的:肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是世界范围内第六大常见恶性肿瘤,占肿瘤相关死亡的第三位,我国更是肝癌高发国家,每年新增患者占全球新发病例的一半以上。目前,尽管肝癌的治疗方法呈多样化发展,但其治疗效果仍无显著提高,高复发率和高转移率对患者的生存有显著影响,其主要原因为肝癌表现出的显著异质性。临床上表现为病情和诊断相似的患者,在接受相同的治疗后,却显示不可预知的截然不同的预后。近年来,随着对肿瘤干细胞研究的不断深入,越来越多的证据表明肿瘤的异质性与肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)的分化密切相关。肿瘤干细胞是肿瘤中少数的可以启动和维持肿瘤生长、保持自我更新能力的细胞。关于CSCs的起源,大多数观点认为其来源于正常干细胞。目前普遍认为肝前体细胞(hepatic progenitor cells,HPCs)的激活与肝癌的发生、发展密切相关,肝前体细胞被认为是癌变的靶点之一。肝前体细胞可以双向分化为肝细胞和胆管细胞,也可在其分化过程中停滞、阻滞,细胞失去正常调控而停止在分化过程中的某个阶段无限增殖,从而形成不同恶性程度、不同干性特征的肝细胞癌,使肝癌具有高度的异质性。前体细胞向不同方向分化决定了肝癌的病理类型。世界卫生组织(World Health Organization,WHO)将原发性肝癌分为肝细胞癌(HCC),肝内胆管细胞癌(ICC),以及同时具备前两者组织学特征的混合型肝细胞-胆管细胞癌(CHC)三类。HCC的预后好于ICC和CHC,提示不同病理类型肿瘤异质性影响患者的预后。近年来研究发现,肝细胞癌中存在一类具有干/祖细胞表型的HCC,其高表达胆管细胞标志物/祖细胞标志物K19,具有更高的侵袭性和更差的预后。这些研究为肝癌的分子分型和相应治疗策略提供了依据。目前,越来越多的越来越多的研究根据HCC不同的分子特征对其进行分型。肝细胞核因子-1beta(Hepatocyte nuclear factor-1beta,HNF1β)属于组织特异性的包含同源结构域的转录因子,和HNF1α同属HNF1家族,是一种核蛋白。HNF1β高表达于成年动物的胆管上皮细胞。在肝脏发育过程中,肝细胞核因子调节肝祖细胞特异基因表达,其中HNF1β在肝祖细胞向胆管上皮细胞的分化过程中具有重要作用。近年来,研究报道HNF1β的表达与多种癌症风险有关,然而关于HNF1β与肝癌的研究报道较少。HNF1β作为一个胆管细胞的特异性标志物,在成人肝脏中只表达于胆管上皮细胞,而不表达于成熟肝细胞。我们推测,HNF1β的表达可能与肝癌的病理类型和预后相关。因此,我们使用免疫组织化学技术检测了HCC和ICC组织中HNF1β的表达,比较HNF1β在不同病理类型肝癌中的表达差异,并在HCC中分析HNF1β的表达与患者术后复发、生存的关系,并探讨可能的机制。研究方法:1.收集临床资料:回顾性地收集了183例原发为HCC,69例原发为肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)的肝癌患者的临床资料和蜡块标本,所有患者接受手术治疗,术后随访患者的复发和生存情况。2.免疫组织化学染色与评估:在癌组织中,用免疫组化技术检测HNF1β和干系标志物(K19,K7,Ep CAM和OV6)的表达情况,免疫组化强度评估采用计算机辅助计算和主观评价。用统计学方法分析它们之间的相关性,以及对患者术后生存和复发的影响。在癌旁组织中,用免疫组化方法检测HNF1β表达情况,以及癌旁胆管反应(ductular reaction,DR)状况。癌旁胆管反应主要检测DR的增值状态(PCNA index of ductular reaction,PIDR)。用统计学方法分析癌旁HNF1β表达与PIDR的相关性,以及对术后复发的影响。3.统计学分析:连续变量接受正态性检验,均数比较用students t检验或方差分析,分类变量采用卡方检验或Fisher确切概率法分析,相关性分析采用Spearman相关性检验,单因素生存分析采用Kaplan-Meier法,生存率的比较采用Log-rank检验,多因素生存分析采用Cox比例风险回归模型。P<0.05有统计学意义。研究结果:1、组织学和临床数据:183例原发为HCC的病例中,169例(92.3%)病人术后发生了复发,其中有15例复发时发生了病理类型改变,改变为ICC。2、HCC与ICC癌组织中HNF1β表达的比较:69例ICC癌组织中59例(85.5%)为阳性表达,其中22例为3+,24例为2+,13例为1+。183例HCC癌组织中,82例(44.8%)为阳性表达,其中35例为3+,14例为2+,33例为1+。ICC中HNF1β的表达显著高于HCC。3、病理类型改变组和病理类型未改变组HNF1β表达比较:复发病理类型改变组15例HCC均为阳性染色,其中12例3+,1例2+,2例1+。复发病理类型未改变组168例中,67例(39.9%)为阳性染色,其中22例3+,14例2+,31例1+。病理类型改变组HNF1β表达显著高于病理类型未改变组。4、HCC癌组织中HNF1β的表达与临床指标的相关性分析:HCC癌组织中高表达HNF1β与更差的组织学分级有显著的相关性。5、单因素与多因素生存分析:在HCC患者总体生存分析中,多因素分析发现,癌组织中HNF1β表达、癌组织中K7表达、肿瘤大小、肿瘤数目和MVI为总体生存的独立预后因素。在无瘤生存分析中,肿瘤HNF1β表达、TNM分级和MVI为患者无瘤生存的独立影响因素。6、HCC组织中HNF1β的表达与肝前体细胞标志物的表达呈正相关:K7(r=0.463,P<0.001),K19(r=0.286,P<0.001),Ep CAM(r=0.210,P=0.004),OV6(r=0.279,P<0.001)。7、HCC癌旁组织中HNF1β的表达与PIDR呈正相关(r=0.312,P<0.001),并且与术后无瘤生存率呈负相关。结论:1.HNF1β在不同病理类型的原发性肝癌中表达有差异,在ICC中呈高表达,在HCC中表达显著低于ICC,仅有部分HCC高表达HNF1β。2.HNF1β阳性表达可能与患者术后复发时病理类型发生改变有关。3.根据HNF1β的表达将肝细胞癌分为HNF1β高表达和低表达两种亚型,HNF1β高表达的HCC患者预后差,与其具有干细胞样表型有关,HNF1β阳性的癌细胞保留一些干细胞样的特征,具有双向分化潜能。