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目的通过比较兔Epi-LASIK与Flap-free Epi-LASIK两种手术方式,探讨其各自角膜愈合方式的特点以及不同角膜上皮愈合方式对早期角膜创伤愈合反应的影响本研究分为二部分实验一兔Epi-LASIK与Flap-free Epi-LASIK术后早期角膜愈合方式的特点实验二兔Epi-LASIK与Flap-free Epi-LASIK术后不同角膜上皮愈合方式对术后早期角膜创伤炎症反应的影响方法实验一建立兔Epi-LASIK、Flap-free Epi-LASIK模型,随机分为1d、2d、4d、7d四组,并设立空白对照组。采用光镜、透射电子显微镜观察术后角膜上皮愈合方式;检测角膜基质细胞数量、角膜基质碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达实验二建立兔Epi-LASIK、Flap-free Epi-LASIK模型,随机分为1d、2d、4d、7d四组,并设立空白对照组。观察两种手术术后切削区域角膜基质炎症细胞数量,角膜基质细胞凋亡数量、检测白细胞介素1(IL-1β)、核转录因子(NF-κB)的表达情况结果实验一(1)形态学观察:Epi-LASIK术后第一天上皮瓣基底膜与基质贴附较为紧密,上皮瓣表面微绒毛减少,但是在术后第二天可见有角膜上皮瓣水肿发生、核周间隙扩大、线粒体水肿,术后四至七天可见上皮瓣水肿逐渐消退,上皮表面微绒毛逐渐增加。Flap-free Epi-LASIK术后第一天即有一层新生角膜上皮覆盖切削区域,以后逐层愈合,此过程未见明显上皮细胞水肿现象,术后第七天可见上皮细胞层数为5-6层,与基质贴附良好,基底膜完整,基质纤维排列较整齐。(2)角膜基质bFGF表达:1d组Epi-LASIK、Flap-free Epi-LASIK角膜基质bFGF表达差异无统计学意义(t=-0.131,P>0.05);2d、4d组Epi-LASIK比Flap-free Epi-LASIK角膜基质表达稍弱,差异有统计学意义(t= -2.339、t= -2.396,P均<0.05);7d组Epi-LASIK、Flap-free Epi-LASIK角膜基质bFGF表达差异无统计学意义(t=-0.099,P>0.05)。提示:Flap-free Epi-LASIK术后角膜基质bFGF表达稍强,可能更有利于术后早期角膜快速愈合。(3)角膜基质细胞数量:术后1d、2d组Epi-LASIK与Flap-free Epi-LASIK均未出现明显的无细胞区,角膜基质数量与正常组对照差异无统计学意义(t=0.21、t=0.24,P均>0.05);其中Epi-LASIK角膜基质细胞数稍多于Flap-free Epi-LASIK,但差异无统计学意义(t=0.972、0.304,P均>0.05)。在4d、7d组Epi-LASIK、Flap-free Epi-LASIK均出现基质细胞增生,但4d组Epi-LASIK角膜基质细胞数较Flap-freeEpi-LASIK少,差异有统计学意义(t= -2.315,P<0.05)。提示两种术式在术后1d、2d未引起角膜基质细胞数量明显减少,在4d、7d基质细胞有所增生。实验二(1)角膜上皮、基质IL-1β表达:角膜上皮IL-1β表达:1d、2d、4d、7d组Epi-LASIK、Flap-free Epi-LASIK角膜上皮层表达差异均无统计学意义(t=1.36、t=0.99、t=0.41、t=1.74,p均>0.05)角膜基质IL-1β表达:术后1d、4d、7d组Epi-LASIK角膜基质IL-1β表达比Flap-free Epi-LASIK强,差异有统计学意义(t=2.12、t=2.69、t=3.63,p均<0.05);2d组Epi-LASIK角膜基质表达虽比Flap-free Epi-LASIK强,但差异无统计学意义(t=1.76,p>0.05)。提示Flap-free Epi-LASIK术后角膜基质IL-1β表达较弱。(2)角膜上皮、基质NF-κB表达:角膜上皮NF-κB表达:术后1d、2d、4d组Epi-LASIK角膜上皮NF-κB表达比Flap-freeEpi-LASIK强,差异有统计学意义(t=14.15、t=16.81、t=8.40,P均<0.01);7d组Epi-LASIK、Flap-free Epi-LASIK角膜上皮层表达差异无统计学意义(t=0.09,p>0.05);角膜基质NF-κB表达:术后2d、4d组Epi-LASIK角膜基质NF-κB表达比Flap-free Epi-LASIK强,差异有统计学意义(t=2.42 ,t=2.72 ,p均<0.05);1d、7d组Epi-LASIK角膜基质表达虽比Flap-freeEpi-LASIK强,但差异无统计学意义(t=1.67 ,t=1.59,p>0.05)。提示Flap-free Epi-LASIK术后角膜基质NF-κB表达较弱。(3)角膜基质炎症细胞数量:术后1d、2d组Epi-LASIK角膜基质炎症细胞数量比Flap-free Epi-LASIK多,差异均具有统计学意义(t=4.18 ,t=4.27,P均<0.01);术后4d、7d组Epi-LASIK、Flap-free Epi-LASIK角膜基质几乎均未见炎症细胞浸润。提示:Flap-free Epi-LASIK术后炎症细胞浸润较少。(4)角膜基质细胞凋亡:术后1d组角膜基质细胞凋亡数目虽然Epi-LASIK比Flap-free Epi-LASIK稍多,但差异无统计学意义(t=1.288,P>0.05) ,术后2d、4d组Epi-LASIK比Flap-free Epi-LASIK凋亡数目多,差异均具有统计学意义(t=3.332、t=2.989,P均<0.05)。提示: Flap-free Epi-LASIK术后角膜基质细胞凋亡数量较少。结论由于Flap-free Epi-LASIK特定的上皮去除方式决定了其不同于Epi-LASIK的上皮愈合方式;Flap-free Epi-LASIK特定的上皮愈合方式减轻了术后早期角膜炎症反应,有利于其正常修复,减少术后刺激症状,同时也可能会减轻术后Haze的程度。