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本研究从自然界中分离筛选出一株高产壳聚糖酶的微生物菌株,经鉴定为Aspergillus fumigatus。通过诱变选育,获得了菌株Aspergillus fumigatus Jxsd-97,并对其发酵产酶条件进行优化,研究确定其最适产酶培养基组分为(%,w/v):壳聚糖1.6,蛋白胨0.4,MgSO4·7H2O 0.04,KH2PO4 0.04,KC10.05,FeSO4·7H2O 0.001,起始pH为5.0;最适产酶培养条件是:250mL摇瓶装液量为50mL,培养温度为28℃,接种量为0.6mL,培养时间为96h。在最适产酶培养条件下,发酵液中壳聚糖酶活力可达到9.35U/mL。采用75%乙醇分级沉淀、透析(分子量:8000~14400)、SP-Sepharose FF离子交换层析对菌株Aspergillus fumigatus Jxsd-97发酵液中的壳聚糖酶进行分离提纯,获得了SDS-PAGE呈单条带的壳聚糖酶,分子量为25kD。对该酶进行了酶学性质的研究,利用薄层层析分析确认酶解产物为壳寡糖,不含氨基葡萄糖,证明了该酶为内切壳聚糖酶。该壳聚糖酶的最适温度和最适pH分别为63℃和pH5.8,酶活力在pH4.5~8.0范围内和45℃以下时相对稳定;金属离子Mn2+对内切壳聚糖酶有强烈的激活作用,而Hg2+,Ag+,Fe3+,Cd2+,Pb2+则有强烈抑制作用。对内切壳聚糖酶的N-端氨基酸序列进行测定,结果为YNLPNNLKQ。N-端氨基酸序列的测定,为克隆表达该壳聚糖酶的基因做好了准备。 研究了壳寡糖的酶法制备条件。在pH5.8,壳聚糖浓度3%,内切壳聚糖酶加入量5U/g壳聚糖的条件下,反应温度45℃,酶解反应时间以3小时较为合适。壳寡糖的得率为95.9%。 研究了利用离子交换树脂来分离纯化壳寡糖。采用大孔弱酸性阳离子树脂D155可以分离纯化寡糖;JK204阴离子交换树脂脱色效果很好。