本文选取不同抗性水平的烟草赤星病病原真菌长柄链格孢(Alternarialongipes)作为研究对象，对它们的二甲酰亚胺类杀菌剂抗药性机理进行了深入的研究。通过扩增菌落形成实验，建立了一种快速、准确评价田间长柄链格孢二甲酰亚胺类杀菌剂抗药性情况的方法。利用紫外线和化学农药选择，筛选得到一批二甲酰亚胺类杀菌剂抗药性菌株。通过简并引物设计和DNA Walking技术扩增得到抗药性相关的组氨酸激酶的全长编码基因。该基因属于第三类组氨酸激酶，除了含有激酶区和反应调节区等组氨酸激酶基本特征外，在N末端含有6组92个氨基酸的重复区。利用基因敲除和实时荧光定量PCR方法对长柄链格孢的第三类组氨酸激酶的生物学功能进行了研究。通过分段表达的策略对长柄链格孢第三类组氨酸激酶进行异源表达分析。利用基因差异性表达技术，对长柄链格孢的其他抗药性相关基因进行克隆，并以多肽脯氨酰基顺反异构酶作为代表基因，通过基因敲除策略对它的生物学功能进行了研究。　　 论文的主要结果为：　　 1.通过田间分离与实验室化学农药和紫外线照射选择培养的方法，获得了大量不同抗性水平的烟草赤星病菌株，并建立了一种快速、准确评价田间烟草赤星病病原真菌对二甲酰亚胺类杀菌剂抗药性情况的方法。　　 2.利用简并引物设计和DNA Walking方法克隆得到长柄链格孢的第三类组氨酸激酶的全长编码基因，通过选择培养和序列比对分析发现：第三类组氨酸激酶在抗药性进化过程中的变化规律，即N末端的6组92个氨基酸重复区的单个点突变赋予长柄链格孢不同水平的二甲酰亚胺类杀菌剂抗药性；第三类组氨酸激酶不是赋予长柄链格孢对二甲酰亚胺类杀菌剂抗药性和渗透压敏感性的唯一因子。　　 3.通过基因敲除和实时荧光定量PCR技术，证明了第三类组氨酸激酶介导长柄链格孢对二甲酰亚胺类杀菌剂的抗药性，渗透压的敏感性和对烟叶的致病性并不依赖于自身表达水平的改变。　　 4.将长柄链格孢第三类组氨酸激酶基因在大肠杆菌中进行分段异源表达，通过飞行时间质谱分析说明组氨酸激酶成功表达，为进一步研究第三类组氨酸激酶的晶体结构奠定了基础。　　 5.通过基因差异表达获得了10多个在不同抗性水平长柄链格孢中差异性表达的基因；利用基因敲除方法，对多肽脯氨酰基顺反异构酶基因进行了功能分析，发现该基因通过表达水平的改变参与了长柄链格孢对渗透压的调节过程。