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阿维菌素含有8种组分:A1a,A2a,B1a,B2a,A1b,A2b,B1b,B2b。其中B1a组分表现出最高的抗虫活性。在这八个阿维菌素组分中,都含有由两个L-齐墩果糖(L-oleandrose)单元以α-1,4-糖苷键连接而成的双糖结构。基因avrCDEFGHI参与合成阿维菌素中的齐墩果糖,然后由糖基转移酶AvrB催化了两步连续的糖基化反应,得到完整的阿维菌素分子。在E.coli BL21(DE3)和Rosseta 2(DE3)pLysS细胞内,基因avrC、avrD、avrE、avrF、avrG、avrI不表达,基因avrH可溶性表达,而基因avrB编码的糖基转移酶形成包涵体。本研究通过密码优化avrF和avrI基因,获得了在E.coli BL21(DE3)可溶性蛋白AvrF,在ArcticExpress(DE3)中可溶性表达蛋白AvrI,合成基因rmlA、rmlB、rmlD、kijB1、tylC1、kijD10,并获得在E.coli BL21(DE3)可溶性蛋白RmlA、RmlB、RmlD、KijB1、TylC1、KijD10,化学合成了AvrH蛋白的可能底物TDP-L-橄榄糖,体外酶学实验证实了AvrH能催化其反应。在确定了TDP-L-齐墩果糖在大肠杆菌中生物合成途径后,通过一步克隆法和基因点突变获得了标准化载体rmlA-PBSK、rmlD-PBSK、tylC1-PBSK、avrF-PBSK、avrH-PBSK、avrB-PBSK、avrI-PBSK、avrE-PBSK、kijB1-PBSK、kijD10-PBSK。通过基因合成获得pau23-pET28a和pau22-pET28a标准化载体。通过一步克隆法获得受体质粒p-sfp-1、p-sfp-2、PBSK-sfp-1、PBSK-sfp-2和RGPA-sfp。将标准化载体和受体质粒通过GoldenBraid连接,获得p-pau23-pau22,p-avrF-rmlD,p-avrH-gfp,p-avrH-avrB,PBSK-avrF-rmlD-avrH-gfp和PBSK-avrF-rmlD-avrH-avrB。然而由于基因kijB1和tylC1连接产生缺失突变,未成功获得p-kijB1-tylC1。因此,重新构建标准化载体PBSK-tylC1-1和受体质粒RGPA-sfp-1,通过Golden Gate获得质粒p-avrH-tylC1,PBSK-avrF-rmlD-avrH-tylC1和RGPA-avrF-rmlD-avrH-tylC1。将质粒RGPA-avrF-rmlD-avrH-tylC1和kijB1-pET28a转化到E.coli BL21(DE3)中获得重组菌,将重组菌发酵,LC-MS检测发酵产物,但是未检测到TDP-L-齐墩果糖。