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目的:研究长春瑞滨脂质体对人喉癌耐药细胞株Hep-2/ADR耐药逆转作用及探讨其可能存在的机制。方法:以人喉癌耐药细胞株Hep-2/ADR为研究对象。分为长春瑞滨脂质体(liposomal vinorelbine,VNB-L)组、长春瑞滨(liposomalvinorelbine,VNB)组、脂质体空泡组、对照组(无药物)分别作用该细胞株,进行以下实验研究。1.采用CCK8法检测Hep-2/ADR细胞株的耐药指数(RI),确定该细胞株具备多药耐药性。2.比较长春瑞滨脂质体(VNB-L)和游离长春瑞滨脂质体载药系统(VNB)以及脂质体空泡组对人喉癌耐药细胞株Hep-2/ADR的增殖抑制作用,分别计算各组IC50。3. RT-PCR检测长春瑞滨脂质体(VNB-L)和游离长春瑞滨(VNB)作用于人喉癌耐药细胞株Hep-2/ADR后MDR1mRNA、GST-π mRNA表达水平变化。4. western blot检测长春瑞滨脂质体(VNB-L)和游离长春瑞滨(VNB)作用于人喉癌耐药细胞株Hep-2/ADR后P-gp、GST-π蛋白表达水平变化。结果:各浓度脂质体空泡组作用人喉癌耐药细胞株Hep-2/ADR抑制率均小于3%,无明显细胞毒性,同课题组前期实验相符[1],不纳入统计分析及RT-PCR及Western blot实验。1.Hep-2/ADR细胞株对DDP、5-FU、ADR的耐药指数分别为:3.76、4.37、11.37,具有多药耐药性,符合本次实验要求。2.长春瑞滨脂质体(VNB-L)和游离长春瑞滨(VNB-L)分别作用人喉癌耐药细胞株Hep-2/ADR,同浓度下的VNB-L组的对耐药细胞的增殖抑制率明显高于VNB组,差异具有统计学意义(P<0.05),VNB-L组的IC50为0.175ug/ml,VNB组的IC50为0.859ug/ml,前者IC50约为后者1/4-1/5。3.在RT-PCR检测结果中,见MDR1、GST-π基因表达于Hep-2/ADR耐药细胞株,药物作用的两实验组,VNB组MDR1mRNA、GST-πmRNA表达上调,VNB-L组MDR1mRNA、GST-π mRNA表达下调,对比空白对照组(无药物组),差异具有统计学意义(P<0.05)。4.western blot检测结果,可见P-gp、GST-π表达于Hep-2/ADR耐药细胞株,药物作用的两实验组,VNB组作用后P-gp、GST-π表达上调,VNB-L实验组P-gp、GST-π表达下调,分别对比空白对照组(无细胞组),差异具有统计学意义(P<0.05),结果与PCR相符。结论:1.CCK8实验中可见同种浓度的VNB-L组和VNB组作用于人喉癌耐药细胞株Hep-2/ADR后,增殖抑制率呈浓度依赖关系,且前者对细胞的增殖抑制率(IR)高于后者,差异具有统计学意义(P<0.05),表明脂质体作为载药系统显著增加了药物的细胞毒性,提高了药效。2. Hep-2/ADR细胞株稳定表达耐药相关基因及蛋白MDR1/P-gp、GST-π,再一次确定了该细胞株的耐药稳定性。VNB作用该细胞株后MDR1/P-gp、GST-π表达上调(差异具有统计学意义,P<0.05),提示VNB引起的耐药可能与P-gp经典通路相关,并且有GST-π介导。3.VNB经过脂质体包载后又能降低P-gp、GST-π蛋白表达(差异具有统计学意义,P<0.05),提示VNB-L可通过对抗MDR1/P-gp、GST-π介导耐药途径逆转Hep-2/ADR细胞株的耐药性,为临床筛选化疗选药提供一定的实验室依据。