论文部分内容阅读
多柔比星(Doxorubicin,DOX)是临床上一种有效的蒽环类抗癌药。然而,由于其具有严重的心脏毒性副作用,临床应用受到了一定限制。二甲双胍(Metformin,Met)是一线口服抗高血糖药,常用于治疗2型糖尿病,对心血管有潜在的保护作用。本文目的在于研究二甲双胍对多柔比星所致心脏毒性的保护作用,并探究其作用机制。在本文中,建立了DOX诱导H9C2心肌细胞毒性模型和DOX诱导大鼠心脏毒性模型,探索Met对DOX所致心脏毒性的保护作用及机制。通过四唑盐比色(MMT)法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡的方法,考察Met对DOX诱导的H9C2细胞的保护作用;通过血清生化仪检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶同工酶-MB亚型(CK-MB),心超心电图检测心功能,H&E染色观察心脏组织形态,TUNEL染色检测心肌细胞凋亡等方法,考察Met对SD大鼠心脏毒性的保护作用。接着,通过检测氧化应激指标,Western-blotting等方法初步探索了二甲双胍对多柔比星诱导的心脏毒性的保护作用的机制。结果显示,Met能够抑制DOX诱导的H9C2细胞的生长抑制和凋亡。Met能降低大鼠心脏损伤指标CK-MB和LDH水平,缓解DOX引起的心功能异常,减少双峰P波和ST段抬高的异常现象,改善DOX造成的心脏组织核溶解,心肌纤维化,空泡化,坏死和炎性细胞浸润等病理特征,减少氧化应激和心肌细胞凋亡。此外,Met显著抑制DOX导致的cleaved-caspase-3和促凋亡蛋白Bax的表达增加,显著抑制DOX诱导的抗凋亡蛋白Bcl-2的表达下调,减少DOX导致的心脏氧化应激,显著抑制由DOX导致丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中p38、JNK和ERK的磷酸化激活,并促进腺苷酸-活化蛋白激酶(AMPK)信号通路中AMPK的磷酸化。同时,在H9C2细胞自噬模型中,Met能调节自噬蛋白,显著抑制DOX诱导的LC3II、Beclin1和P62蛋白表达量的增加,缓解DOX造成的抑制溶酶体的酸化,改善DOX诱导的自噬。体内实验中,Met同样能够显著抑制DOX诱导的LC3II、Beclin1和P62蛋白表达量的增加,改善DOX诱导的自噬。本论文从体内外研究证实了,Met对DOX诱导的H9C2细胞毒性模型和大鼠心脏毒性模型具有很好的保护作用,且保护机制与减少氧化应激和细胞凋亡,调节自噬以及调节AMPK和MAPK信号通路有关。