目的：制备99Tcm标记的血管内皮生长因子（vascular endothelial growthfactor，VEGF125-136）多肽片段探针，并进行其在人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠的体内分布及肿瘤受体显像的实验，评估⁹⁹Tc^m-VEGF_125-136的体外稳定性，体内代谢过程及显像特征，以寻找一种肿瘤特异性分子探针，能够反映肿瘤组织血管生成活性，为肿瘤的早期诊断及靶向治疗提供实验依据。方法：1VEGF_125-136-MAG₃的合成与标记采用自动多肽合成仪常规固相法合成目标多肽QKRKRKKSRYKS，并在合成过程中直接完成与巯基乙酰基三甘氨酸（MAG3）的偶联，形成VEGF_125-136-MAG₃，然后进行⁹⁹Tc^m标记，寻找最佳标记条件。利用高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）及纸层析法测定标记物的即刻标记率，对标记物进行鉴定。同时将标记物于室温中放置1h、2h、6h、12h，采用纸层析法测定其标记率，检测该标记物的体外稳定性。2人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠动物模型的建立复苏人骨肉瘤MG63细胞株，采用贴壁法，DMEM高糖培养基（含10%的灭活胎牛血清）培养，收获对数生长期的细胞，制备成约5×10⁷个/ml细胞浓度的单细胞悬液，按0.2ml/只接种到3⁴周龄的雌性裸鼠的左侧前肢根部背侧。裸鼠在无特殊病原体级（specifc pathogen free，SPF）环境中饲养，待肿瘤长至0.8cm¹.0cm时，选取肿瘤形态较规则，中心无坏死的骨肉瘤荷瘤裸鼠模型纳入实验。取少量瘤体组织,10%甲醛固定,进行病理学鉴定。3⁹⁹Tc^m-VEGF_125-136-MAG₃在人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠体内分布研究取20只骨肉瘤荷瘤裸鼠，随机分为4组:0.5h组、1h组、2h组、4h组，每组5只，分别经尾静脉注射18.5MBq的⁹⁹Tc^m-VEGF_125-136-MAG₃，并于注射后0.5h、1h、2h、4h按组心脏取血后将荷瘤裸鼠处死。取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、肠道、肌肉、骨、脑等主要脏器及肿瘤组织，用生理盐水冲洗干净后滤纸吸干水分，电子天平准确测量主要脏器及肿瘤组织的质量并用单道γ井型计数器测量其放射性计数，取相同注射剂量的99Tcm-VEGF9125-136-MAG3作9Tcm的衰变校正，计算所取标本的每克组织中放射性计数占标准源总计数的比值（%ID/g）；计算肿瘤组织与对侧肌肉组织（正常组织）的%ID/g的比值（tumor to muscle ratios，T/M）。4⁹⁹Tc^m-VEGF_125-136-MAG₃在人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠内肿瘤显像研究取5只骨肉瘤荷瘤裸鼠作为实验组，经尾静脉注射18.5MBq的⁹⁹Tc^m-VEGF_125-136-MAG₃，另取5只荷瘤裸鼠作为竞争性抑制组，同样经尾静脉注射18.5MBq的⁹⁹Tc^m-VEGF_125-136-MAG₃(注射前0.5h先注射VEGF_125-136-MAG₃200μg)，两组分布于注射后0.5h、1h、2h、4h进行肿瘤受体显像，利用感兴趣区技术（region of interest，ROI）以对侧肌肉组织作为非靶（正常）组织，计算不同时间点肿瘤组织与对侧正常组织的放射性计数的比值（T/NT），比较两组间相同时间点显像的差异。5统计学分析所有计量资料均以均数±标准差（x±s）表示，数据处理采用SPSS13.0统计学软件，以P＜0.05表示差异有统计学意义。结果：1⁹⁹Tc^m-VEGF_125-136-MAG₃的制备与鉴定在北京中科亚光有限公司帮助下采用自动多肽合成仪常规固相法直接完成VEGF_125-136-MAG₃的合成。在标记反应总体积为125μl，多肽含量为20μg，99Tcm为3.7×10⁷Bq的条件下，酒石酸钾钠用量为10μl（500μg），氯化亚锡用量为5μg时标记物的标记率较高，在此标记条件下经HPLC法分析，⁹⁹Tc^m-VEGF_125-136-MAG₃呈单峰，即刻标记率大于96%。经纸层析法检测，标记物的即刻标记率为（97.80±1.46）%（n=5），室温下静置12h后标记率仍大于为85%。⁹⁹Tc^m-VEGF_125-136-MAG₃即刻标记率高，无需纯化，稳定性较好。2荷瘤裸鼠模型的观察与鉴定肿瘤位于荷瘤裸鼠左前肢根部背侧，大约1²周成瘤，3⁴周肉眼观察肿瘤长至约0.8cm¹.0cm左右，瘤体呈结节状，质硬，剥离瘤体观察，肿瘤位于皮下与肌肉间，瘤体颜色呈鱼肉色，表面光滑。3⁹⁹Tc^m-VEGF_125-136-MAG₃在骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠体内分布研究结果⁹⁹Tc^m-VEGF_125-136-MAG₃在血液中代谢速率较快，注射后0.5h放射性摄取为（0.23±0.01）%，注射后4h为（0.09±0.01）%；其早期在肾脏内分布最高，其次肝脏及胃肠道内分布较高，并且呈逐渐下降趋势；⁹⁹Tc^m-VEGF_125-136-MAG₃在肿瘤内的放射性计数比值1h时达最高为（0.28±0.02）%，随后逐渐下降；各组内肿瘤组织的%ID/g值各时间点均高于肌肉组织，其T/M值分别为1.60±0.05，3.04±0.07，2.33±0.05，1.70±0.04，以1h时T/M值最高。4⁹⁹Tc^m-VEGF_125-136-MAG₃的荷瘤裸鼠肿瘤显像结果：实验组荷瘤裸鼠注药后0.5h时肿瘤部位隐约显影，1h时在肿瘤部位出现明显放射性浓聚，而后其放射性浓聚程度逐渐下降。利用ROI技术测得0.5h、1h、2h、4h的T/NT值分别为1.16±0.14、3.10±0.19、2.63±0.14、1.90±0.09。竞争性抑制组各时间点肿瘤部位未见明显放射性浓聚，其各时间点的T/NT值分别为0.99±0.05、1.06±0.06、0.98±0.03、0.97±0.03。5统计学分析对实验组与竞争性抑制组组间相同时间点T/NT值进行组间成组t检验，结果显示1h、2h、4h时P值均小于0.05，差异有统计学意义。结论：⁹⁹Tc^m-VEGF_125-136-MAG₃的即刻标记率高，体外稳定性较好；该标记物血液清除较快，主要经肾脏代谢，不通过血脑屏障，可被高度表达VEGF的骨肉瘤组织摄取；该标记物能够顺利进入肿瘤细胞，特异地浓聚于骨肉瘤荷瘤裸鼠种植瘤内，未丧失其生物学活性，且与VEGF受体仍具有高的亲和力。⁹⁹Tc^m-VEGF_125-136-MAG₃可以作为一种能反映骨肉瘤血管生成活性的药物，为肿瘤的早期诊断及靶向治疗提供了实验依据，同时也进一步为肿瘤受体显像研究奠定了基础。