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本研究分2部分。第一部分运用RT-PCR技术,从妊娠第9天的大鼠子宫中扩增出长为423bp的钙离子敏感受体cDNA片段。PCR产物经凝胶回收纯化后,克隆在PGEM-T载体的T位点。测序结果和序列分析表明:成功克隆了钙离子敏感受体基因cDNA序列,为进一步研究钙离子敏感受体在大鼠子宫中的表达与调节奠定了基础。
第二部分以大鼠为实验动物,建立了大鼠早期妊娠、假孕、延迟着床和人工诱导蜕膜化4个动物模型;收集了各种模型的子宫材料,利用免疫组织化学的方法进一步研究了钙离子敏感受体(Calcium-sensingreceptor,CaR)、有活性的激酶C受体(repectorforactivatedCkinase,Rack1)与胚胎着床及蜕膜化的关系。结果发现:CaR蛋白在早期妊娠第1天的腔上皮细胞中呈弱表达;到第2~5天,在腔上皮细胞中呈中等强度表达;到第6天胚胎着床后,着床位点处的上皮下基质中CaR蛋白的水平瞬时显著上升。而在非着床位点及假孕第6天子宫的基质细胞中未见CaR表达改变。在早期妊娠第7~8天,CaR在整个蜕膜组织中强烈表达;妊娠第9天,CaR的强烈表达扩展到子宫内膜的次级蜕膜区,并且CaR在胚胎中强烈表达;在人工蜕膜化模型中,CaR蛋白随着蜕膜化的进程其表达强度逐渐增加,而在对照子宫的基质中未见CaR表达;Rack1在妊娠第6~9天的子宫蜕膜上较强表达;假孕第6~9天和延迟着床的大鼠子宫腔上皮下基质中无明显的免疫信号,而延迟着床激活胚胎周围的腔上皮下基质中有强的免疫信号。蜕膜化子宫中整个蜕膜区呈强的免疫染色信号。这些结果强烈表明:CaR和Rack1参与了胚胎植入及蜕膜化过程。提示将来可研究CaR、Rack1受体阻断剂干扰胚胎的着床,以达到避孕的目的。