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研究背景和目的： 多种应激因素如缺血、乏氧、蛋白质糖基化受阻以及钙代谢障碍等均可导致蛋白质折叠障碍，未折叠的蛋白质堆积于内质网腔内，这种状态被称为内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）。由此引发细胞产生一系列自我保护性反应，即称为ERS反应（endoplasmic reticulum stressresponse,ERSS）。 肿瘤转移为多因素、多步骤参与的复杂病理过程。很多研究表明, PI3K/Akt通路与肿瘤细胞的侵袭和迁移关系密切。PI3K/Akt通路作为细胞内重要信号转导通路，转移瘤组织中 Akt磷酸化水平显著高于原发肿瘤组织。PI3K/Akt通路激活可上调金属蛋白酶MMP-2、MMP-9，引起细胞外基质(ECM)的降解。作为实体瘤，胃癌瘤体内存在缺血缺氧，可诱发ERS反应。我们的前期研究发现ERS可促进胃癌转移，但PI3K/Akt通路在ERS促进胃癌细胞转移中的作用尚不清楚。本研究拟选用两种不同的 ERS诱导剂处理两种不同胃癌细胞系，借以探讨PI3K/Akt通路在内质网应激促进胃癌细胞迁移和侵袭中的作用。 方法： 1.贴壁培养胃癌细胞系BGC823和SGC7901，ERS诱导剂1μg/ml毒胡萝卜素（tunicamycin，TG）或5μg/ml衣霉素（thapsigargin，TM）处理胃癌细胞0、2、12、24、36h后，收集细胞总蛋白，用Western blot技术检测ERS标志物GRP78及XBP1s的表达及AKT的磷酸化水平的变化，以明确PI3K/Akt通路是否被激活。 2.贴壁培养胃癌细胞系BGC823和SGC7901并分组：未加药对照组、ERS诱导剂组及ERS诱导剂加PI3K抑制剂组。收集细胞总蛋白，用Western blot技术检测AKT的磷酸化水平的变化情况，以明确PI3K抑制剂对PI3K/Akt通路的阻断效果。 3.贴壁培养胃癌细胞系BGC823和SGC7901并分组：未加药对照组、ERS诱导剂组及ERS诱导剂加PI3K抑制剂组。利用划痕实验及transwell小室实验检测各组细胞的迁移及侵袭能力；利用Western blot技术检测各组转移相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、MMPs及VEGF的表达。 结果： 1.内质网应激可激活PI3K/Akt通路Western blot结果显示：与0h组相比， ERS诱导剂TG或TM处理胃癌细胞系 BGC823和 SGC79012、12、24及36h后，GRP78及XBP1s的表达明显上调，AKT的磷酸化水平明显提高（P<0.05）。 2.内质网应激状态下PI3K抑制剂可阻断PI3K/Akt通路Western blot结果显示：与对照组相比，TG或TM处理胃癌细胞系BGC823和 SGC7901后， AKT的磷酸化水平明显提高（P<0.05）；与ERS诱导剂组相比，ERS诱导剂与PI3K抑制剂联合处理组AKT磷酸化水平明显降低（P<0.05）。 3.内质网应激激活 PI3K/Akt通路促进胃癌细胞的迁移和侵袭划痕实验及 Transwell小室实验结果显示：与对照组相比，TG或 TM处理胃癌细胞系BGC823和 SGC7901后，胃癌细胞的迁移及侵袭能力均明显提高；与ERS诱导剂组相比，ERS诱导剂与PI3K抑制剂联合处理组胃癌细胞的迁移及侵袭能力均明显下降（P<0.05）；Western blot结果显示：与对照组相比，N-cadherin、MMPs及VEGF蛋白表达明显增强，E-cadherin表达明显下调（P<0.05）；与ERS诱导剂组相比，ERS诱导剂与PI3K抑制剂联合处理组N-cadherin、MMPs及VEGF蛋白表达明显下调，E-cadherin表达明显增强（P<0.05)。 结论： 内质网应激可激活 PI3K/Akt通路，诱发胃癌细胞发生上皮间质化，并上调转移相关蛋白MMP2、MMP9、VEGF，进而促进胃癌细胞的侵袭和迁移。