腹泻仔猪源E.coli的分离及毒力因子分子流行情况调查

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致病性大肠杆菌是引起仔猪腹泻的重要病原之一,给养猪业带来了严重的经济损失。为了了解湖南省部分地区腹泻仔猪源大肠杆菌的耐药性、毒力基因的流行情况,本研究从规模猪场腹泻仔猪中分离出705株腹泻仔猪源大肠杆菌,进行了以下相关试验:1.从9个猪场采集腹泻仔猪的肛门拭子和2011-2014年本实验室接收送检的PEDV(+)腹泻仔猪病料,利用麦康凯平板、革兰氏染色镜检和PCR方法共鉴定705株大肠杆菌。并通过K-B法检测各猪场分离的大肠杆菌对5类抗生素(四环素类、磺胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、头孢类)中的9种药物的耐药性。结果显示:各猪场分离的大肠杆菌群体上对头孢噻吩、头孢曲松、恩诺沙星、阿米卡星的耐药性较低,对氧氟沙星、氟苯尼考、强力霉素、复方新诺明、链霉素的耐药性较高。2.利用多重PCR方法对705株大肠杆菌分离株进行毒素基因(STa、STb、LT1、Stx2e、 eaeA)和黏附素基因(F4、F5、F6、F41、F18ab、F18ac)的检测。结果表明:共175株大肠杆菌检出毒素基因,检出率达24.5%(175/705);共57株大肠杆菌检出黏附素基因,检出率达8.0%(57/705);共22株大肠杆菌能同时检测出毒素基因和黏附素基因,检出率达3.1%(22/705);根据毒素特征可将毒素基因阳性菌株分为五类:产肠毒素大肠杆菌(ETEC)、产志贺毒素大肠杆菌(STEC)、吸附消除型大肠杆菌(AEEC)、产肠毒素大肠杆菌/产志贺毒素大肠杆菌(ETEC/STEC)和吸附消除型大肠杆菌/产志贺毒素大肠杆菌(AEEC/STEC),统计发现分别占毒素基因阳性菌株的68.6%(120/175)、37.3%(28/175)、5.1%(9/175)、8.6%(15/175)和1.7%(3/175),说明本文分离的腹泻仔猪源大肠杆菌以ETEC为主。3.另外,本研究还采用PCR方法对这705株大肠杆菌分离株进行溶血素基因(H1yA)和HPI毒力岛基因(irp2)检测,阳性率分别为:8.4%(60/705)和32.9%(235/705)。
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