目的：本实验构建含人烯醇化1(ENO1)目的基因的重组逆转录病毒载体,为下一步研究ENO1在肿瘤中作用和与宫颈癌细胞化疗之间的相关性做好准备。方法：从液氮中复苏人宫颈癌细胞,用DMEM细胞培养基培养细胞并提取其细胞中总RNA。按照cDNA合成试剂盒操作说明,以人宫颈癌细胞的总RNA为模版合成cDNA。根据GenBank中的烯醇化酶ENO1基因序列设计上下游引物由公司合成,然后以合成的cDNA为模版,PCR扩增目的基因ENO1。按照胶回收试剂盒操作说明胶回收PCR产物ENO1和pBABE-Puro质粒。用sall和BamH1双酶切胶回收后的目的基因ENO1及pBABE-Puro质粒,用纯化试剂盒纯化双酶切的目的基因ENO1及pBABE-Puro贡粒,后用连接酶将目的基因插入质粒中,然后将重组质粒转化感受态E. coli DH5a大肠杆菌,选取阳性克隆扩菌后提取ENO1-pBABE-Puro重组质粒进行sall和BamH1双酶切酶切鉴定及保菌并送含有ENO1-pBABE-Puro质粒的E. coli DH5a大肠杆菌菌液到测序公司测序。结果：重组逆转录病毒载体ENOl-pBABE-Puro中的ENO1测序结果与GenBank上的序列完全一致,克隆的目的基因已经正确插入到逆转录病毒载体。结论：成功构建了含有ENO1目的基因的重组逆转录病毒载体,为下一步研究ENO1在肿瘤中的作用和与宫颈细胞化疗之间的相关性做好准备。