非极性二肽与一价金属离子的相互作用及其DNA切割活性研究

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肽类化合物是由氨基酸经过脱水缩合得到的一类物质,这类化合物是涉及到生物体内多种细胞功能的生物活性物质,在自然界中普遍存在。研究发现肽类化合物与金属离子作用后具有多种生物活性,在抗生素、抗细菌、抗病毒、抑杀癌细胞、调节免疫力及离子载体等方面发挥了巨大的作用,其作用机制是分子生物学和药物学研究的主要课题。同时肽类物质又是生命体内蛋白质的主要组成部分,与生命活动有紧密的联系,因此对肽类化合物的相关研究越来越吸引人们的关注。本文利用凝胶电泳技术研究了由八种非极性α-氨基酸组成的直链二肽(甘氨酸二肽,L-丙氨酸二肽,L-缬氨酸二肽,L-亮氨酸二肽,L-异亮氨酸二肽,L-苯丙氨酸二肽,L-脯氨酸二肽,L-蛋氨酸二肽)自身以及在二价金属离子(Cu2+,Ca2+,Mg2+,Zn2+,Co2+)辅助下,对pUC19质粒DNA的切割活性。结果表明,八种非极性二肽自身对pUC19DNA几乎没有切割活性,而在金属离子的辅助下有明显的活性。进而利用凝胶电泳技术对非极性二肽切割pUC19DNA时的最佳缓冲体系,最佳辅助金属离子,最佳溶液pH范围,非极性二肽的最佳浓度,最佳作用时间进行了筛选。研究发现,非极性二肽切割pUC19DNA的最佳金属离子为Co2+离子,最佳缓冲体系为Tris-HCl溶液,最佳pH为6.8-7.0,最佳作用时间几乎均为12小时;由于非极性二肽自身溶解度和侧链的不同,使它们切割pUC19DNA的最佳浓度也大不相同,最佳浓度最大的是L-苯丙氨酸二肽,最小的是甘氨酸二肽,而L-丙氨酸二肽对pUC19DNA的切割活性几乎不受浓度影响。在所筛选出来的最优条件下,每一种非极性二肽对pUC19DNA都有较好的切割活性,切割率都达到了80%以上。本文对非极性二肽的切割机理也做了初步的探究,研究发现非极性二肽对DNA的切割机理为水解机理。同时分别利用电喷雾质谱法和高效液相色谱技术(HPLC)研究了非极性二肽与一价金属离子间的相互作用,并通过计算它们的结合常数来比较它们之间作用力的强弱。利用液质联用仪测出了八种非极性二肽与五种一价金属离子(Na+、K+、Li+、Cs+、Ag+)的结合常数,结果表明,在相同的液相条件下,L-苯丙氨酸二肽和L-蛋氨酸二肽与一价金属离子的作用力最强,特别是与Ag+离子的作用最强,而L-脯氨酸二肽与一价金属离子的作用最弱;并考察了不同的阴离子对非极性二肽与一价金属离子间相互作用的影响。高效液相色谱法采用的是Fujimura法:即不断改变流动相中金属离子的浓度,根据非极性二肽的保留时间的变化,拟合得到了不同非极性二肽与一价金属离子(Na+、K+、Li+、Cs+、Ag+)的结合常数。结果表明,相同的非极性二肽在五种一价金属离子中,与Ag+离子的作用力最强;相同的金属离子与八种非极性二肽作用中,与L-苯丙氨酸二肽和L-蛋氨酸二肽的结合能力最强,与L-脯氨酸二肽的结合能力最弱。本研究对于阐明非极性二肽与金属离子间识别作用力与结构之间的关系,具有重要的理论意义和应用价值。同时,根据我们的实验结果,可以将金属离子与不同二肽作用强度存在差异的特性,应用于分子识别的研究中。
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