噻虫嗪和啶虫脒属于新烟碱类杀虫剂,其作用方式是通过抑制乙酰胆碱酯酶活性,从而干扰昆虫神经信号传导,达到致死目的。因其速度快、持效期长、杀虫谱宽以及对哺乳动物低毒等优点,在农业生产上被广泛使用,从而造成农产品中可能会发生噻虫嗪和啶虫脒残留。因此,亟需建立一种快速、灵敏的免疫分析方法,以实现对农产品中噻虫嗪和啶虫脒残留筛查。本文研究主要包括两部分内容,一是利用合成的噻虫嗪人工抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤制备技术,成功筛选出一株能稳定分泌抗噻虫嗪单克隆抗体细胞株;二是利用生物素化的抗啶虫脒单克隆抗体,通过实验条件优化,成功建立了花粉中啶虫脒残留免疫分析方法。主要结论如下:(1)本研究以噻虫嗪为研究对象,利用一步法合成了噻虫嗪半抗原,利用活泼酯法将噻虫嗪半抗原分别于牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成免疫原与包被抗原,免疫BALB/c的小鼠,利用细胞融合技术成功制备获得1株分泌稳定的抗噻虫嗪单克隆抗体的细胞株为3F7,鉴定的抗体亚型为IgG1。(2)利用合成的啶虫脒半抗原(H1)和噻虫嗪半抗原(H2),通过活泼酯法制得两种包被抗原H1-OVA和H2-OVA,基于效价及竞争测定,选用分析灵敏度更好的H2-OVA进行后续实验。。通过对抗原抗体浓度、离子强度和pH值等实验条件的优化,成功建立了生物素化的间接竞争酶联免疫吸附测定(Bic-ELISA)方法检测啶虫脒残留的标准曲线,回归方程为y=0.4102x+0.5978,R2=0.9908,最低检出限(LOD)为0.17 ng/mL。该方法具有较好的特异性,可用于啶虫脒的定性定量检测。基于实验室前期研究,我们通过花粉样品前处理,利用Bic-ELISA成功检测了三种花粉(荷花花粉、茶花花粉和油菜花花粉)中啶虫脒残留,添加回收率为 81.1%-108.0%,相对标准偏差为 4.8%-10.9%,6.1%-11.7%,与HPLC-MSMS结果一致,表明我们所建立的方法准确可靠,实验结果将为花粉样品中啶虫脒残留的市场监管提供一定的技术支持。