【摘 要】
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牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）对我国养牛产业的威胁不容小觑,持续关注牛源BVDV毒株的生物学和遗传学特征有助于我们动态掌握此种病毒对于牛饲养和生产的潜在威胁。目前,BVDV主要以疫苗免疫为主,没有一个有效的预防和治疗的方法,需要从病毒感染及复制机制方面有一个更深的认识。BVDV NS5A可以结合病毒5′-UTR,并与3′-UTR互作诱发氧化应激
【基金项目】
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西北民族大学引进人才科研项目,项目编号:xbmuyjrc202225；
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牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）对我国养牛产业的威胁不容小觑,持续关注牛源BVDV毒株的生物学和遗传学特征有助于我们动态掌握此种病毒对于牛饲养和生产的潜在威胁。目前,BVDV主要以疫苗免疫为主,没有一个有效的预防和治疗的方法,需要从病毒感染及复制机制方面有一个更深的认识。BVDV NS5A可以结合病毒5′-UTR,并与3′-UTR互作诱发氧化应激,从而调节病毒基因组的复制,BVDV m RNA 5′端没有帽子结构,m RNA的翻译依赖于内部核糖体进入位点（internal ribosome entry site,IRES）元件,IRES可作为核糖体结合位点起始翻译。本研究采集我国四个省份新生牛血清样本676份,其中宁夏376份、陕西100份、山东100份、内蒙100份。通过RT-PCR和ELISA的方法分别检测血清样本的BVDV感染率,结果发现,四个省份的病毒核酸阳性率分别为12.7%（48/376）、4%（4/100）、2%（2/100）和1%（1/100）,BVDV抗体阳性率分别为9.04%（34/376）、4%（4/100）、16%（16/100）和12%（12/100）。对RT-PCR检测到的病毒核酸阳性血清样本经过滤除菌后接种MDBK细胞,分别获得了一株细胞病变型（cytopathic,CP）BVDV-1型毒株,命名“21SD-16”和一株CP BVDV-2型毒株,命名“22Anhui-7”。通过设计全基因组引物,对基因序列进行扩增,得到了“21SD-16”和“22Anhui-7”的全基因组序列。系统发育进化树显示“21SD-16”与BVDV-1“Bega-like”在核酸水平上相似性较高（93.4%）,“22Anhui-7”与BVDV-2“GS2018”的相似性较高（99.7%）。并且按Karber法计算其病毒滴度分别为106.2TCID50/0.1m L和108.3TCID50/0.1m L。然后通过分析BVDV-1和BVDV-2 NS5A抗原性及结构特性,分别设计NS5A基因的特异性引物,扩增NS5A基因片段,克隆至表达载体pc MV-c-flag中,构建真核表达载体pc MV-c-flag-NS5A,同时构建BVDV IRES顺时作用元件的双报告载体pcDNA3.1（+）-EGFP-IRES-Npro-flag,通过Western-blot分析NS5A对IRES启动的Npro-flag蛋白表达水平的影响。结果发现I型和Ⅱ型BVDV NS5A均可抑制IRES介导的翻译,为进一步阐明BVDV复制增殖的分子机制提供新的实验依据,也为防控BVD提供技术保障与基础。
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