单纯疱疹病毒2型(herpessimplexvirustype2，HSV-2)糖蛋白D(glycoproteinD，gD)是HSV-2US6基因的转录翻译产物，与病毒吸附、膜融合有关，介导病毒胞间扩散，其抗体有中和作用。gD2是HSV糖蛋白中免疫原性较强的糖蛋白，具有在HSV-2和HSV-1之间具有较高同源性的特征，能在体内引起高滴度的中和抗体。HSV-2gD是抗HSV感染中最重要的保护性抗原，它能诱导细胞免疫和体液免疫反应，保护动物免受HSV的攻击，抑制隐性感染的发生。HSV-2gD的高效表达和纯化为深入研究其生物学功能和免疫学特性有积极的意义，同时对于其亚单位疫苗和抗体的制备奠定基础。 该项研究主要内容包括HSV-2gD的扩增获得，毕赤酵母表达载体的构建和在毕赤酵母中的表达的研究。 在研究中，分析GENEBANK中的不同HSV-2gD基因序列，PCR扩增去除信号肽的HSV-2gD全长序列；并且将序列TA克隆到pMD18T线形载体中，获得重组pMD18T-gD2质粒；质粒经过序列测定分析，与GENEBANK中的NC_001798的HSV-2gD碱基序列同源性为99.4％，蛋白序列同源性为97.3％。 设计五条引物，加入XhoⅠ和XbaⅠ两个酶切位点，同时引入HSV-2gBCTL表位序列基因和终止密码子；以pMD18T-gD2质粒为模板PCR扩增得到四个含有不同的末端的PCR产物，PCR产物经过XhoⅠ和XbaⅠ双酶切后和PICZαA空载体连接后得到四个HSV-2gD毕赤酵母表达载体；载体采用通用引物测序分析，载体的分泌肽序列和设计的5末端正确地接合，载体中的HSV-2gD碱基序列与GENEBANK中的NC_001798的HSV-2gD碱基序列同源性为99.3％，变化的部分没有影响到碱基中的基序(motif)，蛋白序列同源性为97.3％，变化的部分没有在蛋白的主要的功能区中。 将四个载体经SacⅠ线形化后，电转化后转入到毕赤酵母GS115中，筛选转化子后，采用PCR的方法鉴定四个质粒中目的序列都已经整合到GS115的基因组中，同时得到转化子的表型都为Mut+。 甲醇诱导重组转化得到的工程菌，收集发酵液上清。发酵液上清经SDS-PAGE检测发现在蛋白分子量43KDa附近有两条明显条带，与预计的蛋白分子量相近，初步认为是毕赤酵母表达的重组HSV-2gD蛋白；经过浓缩后，采用Dot-Blotting分析蛋白具有活性。