淋巴瘤寡核苷酸芯片的制备及其在淋巴瘤细胞系基因表达谱研究中的应用

来源 :中国人民解放军军事医学科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dfsdfdf
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肿瘤的发病机制十分复杂,肿瘤相关基因在肿瘤的发生、发展、治疗与预后中发挥着重要作用。关于肿瘤相关基因的结构与功能、表达与调控及其在细胞周期与细胞凋亡调节中的作用是近年来肿瘤研究的热点,也是弄清肿瘤发病机理的难点。以往的研究主要是运用PCR或核酸分子杂交的方法来逐个检测基因的表达,既费时费力效率低,而且不同基因在生物体内形成一个复杂的调控网络,对单个基因位点的作用可能对另外的基因表达产生影响。因此,肿瘤发病机制的研究应该从生物整体系统的角度出发,从基因网络的层次上探求其分子机制,为肿瘤的预防、诊断和治疗等提供可能的途径。基因芯片技术作为一种高通量、快速、平行的基因表达信息检测与分析技术,对于研究肿瘤调控基因表达的分子机理是一种强有力的工具。建立以基因芯片技术为核心的肿瘤相关基因作用机理研究技术平台,对于彻底弄清肿瘤的发病机制和找到有效的治疗途径而攻克肿瘤这种人类健康杀手具有重要意义。 研究目的:本研究制备了含116条淋巴瘤相关基因的寡核苷酸芯片,并以此筛选了在Burkitt’s淋巴瘤(BL)和皮肤T细胞性淋巴瘤(CTCL)细胞系细胞与正常淋巴细胞间差异表达的基因,并将对其功能进行了初步的生物信息学分析,以期为探讨淋巴瘤的发病机制、筛选和鉴定肿瘤相关基因、早期诊断和分子分型、发现和确定治疗新途径等方面提供一些线索和理论依据。军事医学科学院硕士学位论文 研究内容: 1)淋巴瘤寡核昔酸基因表达谱芯片的制备:以荧光素酶、恶性淋巴瘤相关基因为研究对象,采用计算机软件设计并经BLAsT分析筛选基因特异寡核营酸探针,探针长度4 ont,Gc含量45一55%,5’或3’氨基修饰,浓度为0 .sug/pl;质控方法采用定量阳性对照结合定量内标的方法对杂交过程和检测结果进行监测; 2)淋巴瘤基因芯片在淋巴瘤细胞系基因表达谱研究中的初步应用:用淋巴瘤寡核昔酸基因表达谱芯片对BL(N二alwa、Daudi、Raji)和cTCL(H9、Hu七一78)的基因表达谱进行了检测,并对筛选出的差异表达基因进行初步的生物信息学分析。 结果:本实验从BL和cTcL细胞系细胞/正常淋巴细胞中成功筛选出16个差异表达的基因。在Burkit七‘。淋巴瘤细胞中发现11条差异表达基因(9 .48%):上调表达7条,下调表达4条;在皮肤T淋巴瘤细胞中发现8条差异表达基因(6 .89%):上调表达6条,下调表达2条。经生物信息学初步分析,发现这些基因与细胞的信号转导、周期调控及增殖、分化、凋亡调控等密切相关。 结论:寡核昔酸芯片是一种筛选差异表达基因的有效工具,恶性淋巴瘤在发病过程中存在多基因表达调控的改变,利用这一技术来研究恶性淋巴瘤相关基因群的改变有助于认识其发病机制,亦为临床诊断、分子分型和治疗等提供了线索和依据,对于彻底攻克恶性淋巴瘤这种疾病具有重要的理论和实践意义。
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