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乌饭树(Vaccinium bracteatum Thunb.)又名南烛、染菽,属杜鹃花科越橘属常绿灌木,广布于我国长江以南地区,以及马来西亚、日本、泰国等东南亚国家。宋《开宝本草》、明《本草纲目》均记载乌饭树叶有益精气、强筋骨、明目、止泄等功效。乌饭树叶也作为畲药使用。在我国江南等地区,自唐代以来有每年阴历三月初三用乌饭树鲜叶或其叶汁蒸煮乌饭(又称青精饭)食用的习俗。乌饭树鲜叶是一种天然的黑色食品染色剂,制作的乌米饭光泽明亮,并具有特殊诱人香气。但该鲜叶中的染色有效成分及其机制还不明确,因而乌米饭至今还一直局限于在当季时令食用鲜叶。本文拟对乌饭树叶中的染黑有效成分进行研究,为乌饭树叶的开发应用提供科学参考。采用低温干燥的乌饭树叶,首次以大米染黑效果为活性跟踪方法,对其染色有效成分进行分离。乌饭树叶(500 g)经甲醇提取,浓缩液经AB-8大孔树脂柱吸附,依次用0%、20%、40%、75%、95%乙醇洗脱,经测试染黑成分主要在75%乙醇洗脱液部分;该75%乙醇洗脱液再采用反相C18柱纯化,依次用30%、33%、36%、40%、45%、50%、60%甲醇洗脱,经测试染黑成分主要在36%50%部位,并从36%甲醇洗脱液中获得主要单体成分VB01。经1H、13C和2D-NMR测试分析,并与文献数据对照,确定VB01结构为环烯醚萜苷类成分10-对-香豆酰基水晶兰苷,即乌饭树苷。采用高效液相法分析,首次建立了乌饭树叶中乌饭树苷的含量测定方法。色谱条件:选用Agilent 1260高效液相色谱系统;紫外检测波长320 nm;Cosmosil 5C18-PAQ色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);乙腈(A)-0.3%乙酸溶液(B)流动相梯度洗脱,025 min,15%35%A;流速1.0 ml/min。乌饭树苷分离度良好,在0.052080.5208mg/ml范围内线性良好,加样回收率为98.61%。乌饭树叶中乌饭树苷的平均含量为5.17 mg/g。该测定方法快速、准确,可以为乌饭树叶的质量控制方法提供参考。