青鱼MAVS的克隆及功能初探

来源 :湖南师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tgxmsc
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MAVS(线粒体抗病毒信号蛋白)在宿主细胞抵御微生物病原体的固有免疫应答中扮演着一个重要的角色。在这篇研究中,我们克隆了青鱼MAVS的cDNA全长序列,并对MAVS的功能进行了初步研究。青鱼MAVS全长cDNA由2352个核苷酸组成,由软件预测的MAVS蛋白包含有579个氨基酸,分子量为62.4kDa,等电点4.83。结构分析显示青鱼MAVS的功能性结构域包括N端CARD结构域(半胱氨酸蛋白酶激活和募集结构域),中间富脯氨酸结构域,假定的TRAF2结合位点和C端跨膜结构域,这与哺乳动物的MAVS相类似。序列比对显示青鱼MAVS与其它已知的鱼类和哺乳动物的MAVS的CARD结构域有着很高的相似性(53.3%-97.6%),这也暗示了鱼类和哺乳动物的MAVS的CARD结构域具有保守性。青鱼MAVS在所有选定的组织中都有稳定表达,包括鳃、肾脏、心脏、肠、肝脏、肌肉、皮肤和脾脏;在GCRV和SVCV病毒感染后,肠、肝脏和肌肉组织中的青鱼MAVS mRNA水平明显提高,但是在感染GCRV和SVCV病毒的青鱼脾脏中的MAVS转录水平却下降了。在免疫印迹分析中,我们检测出青鱼MAVS蛋白在HEK293T细胞中外源表达的情况下存在多带现象,这也与哺乳动物的MAVS相类似。免疫荧光分析表明青鱼MAVS是一种线粒体蛋白,同时我们用双荧光报告分析发现在组织培养的情况下青鱼MAVS能够诱导斑马鱼干扰素和EPC干扰素的表达,接下来的青鱼MAVS在EPC细胞中的抗病实验也显示出在过表达青鱼MAVS的情况下,EPC细胞能有效抵御SVCV病毒侵染,表现出病毒斑减小,出现病毒斑时间推迟及病毒滴度相比于对照组减少的现象。这篇文章的数据为将来研究青鱼MAVS在固有免疫系统中的作用机制打下了坚实的基础。
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