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目的:通过应用低能量发散式冲击波(rESW)对兔骨髓间充质干细胞(BMSC)进行直接刺激,观察发散式冲击波对BMSC增殖特性的影响。本研究从BMSC冲击波刺激的反应出发,探求发散式冲击波促进关节软骨损伤修复的理论基础和作用机制。方法:在细胞实验部分,我们采用差速离心法和悬浮贴壁法从2~3月龄的新西兰白兔的胫骨骨髓中培养原代培养至P4~P6代。分别从形态学、表面BMSC,分子和分化能力(成脂、成骨)等方面对进行鉴定。用不同剂量的发散式BMSC冲击波对悬浮的进行直接刺激,根据冲击波剂量对实验进行分组,分为0BMSC四组(Bar为冲击波压力单位)。对冲击波刺激组与对照组的bar/1 bar/2 bar/3 bar分别进行CCK-8检测和BMSC检测比较其增殖活性,用统计学软件对实验CFU-F结果进行统计学分析。在动物实验部分,我们使用与之前实验等月龄的新西兰白兔制作膝关节软骨缺损模型,将每只兔子的左侧膝关节设为实验组,右侧膝关节设为对照组。实验组采用微骨折加2bar冲击波进行干预,而对照组只采用微骨折术。手术后24小时将骨髓等量冲出进行体外实验,在不同时间点对比CFU-F增殖聚集情况。在对数据结果进行分析统计时,我们使用BMSC软件并使用SPSS16.0软件对图像进行处理分析。ImageJ结果:通过骨髓分离技术我们可以获得原代在倒置相差显微镜下观BMSC,察细胞形态,类似成纤维细胞样聚集分布。在表面分子分析中,缺乏典型BMSC的造血细胞抗原CD45分子、CD14分子,也不表达CD79α和CD90,高表达CD45和CD81。在诱导分化实验中,可以被成功诱导为骨细胞、脂肪细胞,通过BMSC相应的染色得到证实,并检测相关转录因子表达。经不同的冲击波进行刺激后,表现出不同的增殖特性。无论是CCK-8检测还是BMSC检测,冲击波刺激CFU-F组都明显优于对照组,并且2Bar时其效应最强,其差异具有统计学意义(P<0.05)。在动物体内实验进行CFU-F检测中,对术后24小时分离的MSc培养,并于第8天、11天、15天进行CFU-F检测,结果显示实验组增殖活性均优于对照组,其结果具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.我们发现兔BMSC在表面分子检测中CD90为阴性,这是与以往文献中的报道是不同的。2.发散式冲击波体外刺激BMSC具有促进其增殖和聚集作用,在冲击波剂量为2bar时其促增值作用最强。3.发散式冲击波对BMSC的作用呈现剂量相关性,其对于冲击波的软骨修复剂量具有指导作用。4.在动物实验中,采用微骨折术配合冲击波进行软骨缺损修复研究,为提出一种改良的微骨折术提供理论依据。