【摘 要】
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目的:应用RNA沉默技术沉默细胞内Wnt10b蛋白的表达,探讨Wnt10b蛋白对人肝癌HepG2细胞增殖、周期、凋亡、迁移及侵袭的作用。方法:根据Wnt10b m RNA编码序列设计RNA干扰靶点并
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目的:应用RNA沉默技术沉默细胞内Wnt10b蛋白的表达,探讨Wnt10b蛋白对人肝癌HepG2细胞增殖、周期、凋亡、迁移及侵袭的作用。方法:根据Wnt10b m RNA编码序列设计RNA干扰靶点并构建特异性小发夹RNA(shRNA),通过慢病毒载体稳定转染入HepG2细胞,采用Western blot检测Wnt10b蛋白的表达。采用CCK-8增殖实验、平板克隆形成实验、流式细胞术、Hoechst 33342荧光染色、划痕愈合实验和Transwell小室,观察HepG2细胞增殖、周期、凋亡、迁移及侵袭情况。结果:(1)Wnt10b shRNA对Wnt10b蛋白表达水平有显著的下调作用(P<0.05)。(2)体外实验结果显示,与control组HepG2细胞相比,两组shWnt10b HepG2细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力均明显受抑制(P<0.05),处于S期的细胞数量明显增加(P<0.05),凋亡率明显增加(P<0.05)。结论:下调Wnt10b蛋白表达可显著抑制HepG2细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力,阻滞细胞周期,诱导凋亡,提示Wnt10b在人肝癌细胞恶性增殖、细胞周期、凋亡和迁移侵袭等过程中扮演癌基因的角色,其可望作为一个潜在的基因治疗靶点,为临床上肝癌的防治提供新思路。
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