核盘菌蛋白激发子SsCut的基因克隆、原核表达及诱导植物的多重防卫反应

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:suyi0911
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核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary)引起的油菜菌核病是油菜上的一种重要病害。目前对于该病的防治主要采取以种植抗病品种为基础、改进栽培管理、适时化学防治的综合治理策略。由于生产上缺乏高抗品种,农业防治费时费工且收效甚微,化学防治又易导致环境污染、农药残留及抗药性。因此,需要发展天然且环境友好型的制剂对油菜菌核病进行防治。激发子可替代化合物,诱发植物的抗病性,从而阻止或限制病害的发生和扩展。本研究根据核盘菌的全基因组数据信息,通过基因芯片信息筛选出可能诱导植物产生非寄主抗性的角质酶基因。在实验中,对核盘菌编码角质酶的SsCut基因(GenBank Accession No. XM001590986.1)进行了克隆,该基因片段大小为609 bp,编码分子量为20.4 kDa含有202个氨基酸的多肽,SsCut异源表达产物(His-SsCut)能够引起烟草叶片类似过敏性坏死反应(Hypersensitive response,HR)的坏死斑,同时还能引起拟南芥(Arabidopsis)、大豆(Glycine max)、油菜(Brassica napus)、水稻(Oryza sativa)、大麦(Zea mays)和小麦(Triticum aestivum)等其他双子叶和单子叶植物叶片的坏死反应。此外,激发子His-SsCut处理后与植物抗病相关的过氧化氢、苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanine ammonia lyase, PAL),过氧化物酶(Peroxidase, POD)和多酚氧化酶(Polyphenol oxidase, PPO)也有显著的变化。激发子His-SsCut能明显提高植株的抗性,显著抑制大豆疫霉(Phytophthora sojae)、烟草疫霉(P. nicotianae)和核盘菌(S. sclerotiorum)在寄主上的病斑扩展。实时荧光定量PCR显示,激发子能够调节与抗病相关基因和信号转导相关基因的表达。本研究证明激发子His-SsCut能够触发植物的防卫反应,并有助于阐明它与下游信号诱导的防卫反应的相关性。
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