Shh信号通路在MNNG转化GES-1细胞系恶变中的作用机制

来源 :山西医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:mgqzhineng
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目的:研究经低浓度化学诱导剂MNNG转化GES-1细胞系为恶性细胞MC,用以探讨Sonic Hedgehog信号通路在胃癌细胞中的激活方式。方法:复苏冻存的GES-1细胞,待细胞生长至铺满瓶底时,细胞可以传代或冻存留种;在生长旺盛的GES-1细胞中加入5ml不含有血清的培养液及10ul0.01mol/L MNNG,使MNNG终浓度为2X105mol/L (DMSO浓度0.2%),避光培养24小时,第二天更换不含MNNG的培养液,继续培养,此细胞记作MC,记录细胞的形态变化;取对数生长的GES-1细胞及MC细胞,制备染色体及R显带与染色,观察染色体的变化;应用10mg/L的Shh抗体阻断MC细胞中Shh信号通路,对照组应用PBS,流式细胞仪检测MC细胞凋亡情况。结果:细胞形态明显发生变化,出现不规则形、长梭形、多触角形及多核形细胞,10天左右MC细胞开始增殖,细胞间接触紧密,呈多层生长、岛样单克隆生长,13天左右MC细胞可以传代;GES-1细胞的染色体为非整倍体,染色体众数在50—60之间,MC细胞染色体在65—85之间,甚至可达100条以上,畸形率明显增加;实验组凋亡率6.63±1.02,对照组凋亡率0.93±0.49,两组间比较差异有统计学意义(P〈0.001)结论:MC细胞具有恶性细胞的生物学特点,Shh信号通路在胃癌中激活方式是配体依赖型。
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