论文部分内容阅读
氢溴酸西酞普兰(Citalopram Hydrobromide，CTH)为新一代选择性5-HT再摄取抑制剂，具有使用剂量小、药理活性高、副作用少、耐受性好等特点，在临床中可用于多种类型抑郁症的治疗。目前，CTH已上市剂型有片剂、口服溶液和胶囊剂等。上述制剂普遍吸收缓慢，且易产生胃肠道副作用；此外，该药物极性大，不易透过血脑屏障，口服给药后由血液循环进入脑内药量少，从而影响其临床疗效。鼻腔给药具有吸收起效快，生物利用度高，可绕开血脑屏障，直接向脑内递送给药等特点。因此，本文拟以CTH为模型药物，研制该药物的一种鼻腔给药新剂型—鼻用原位凝胶剂，以期达到吸收起效快、生物利用度高、使用方便、脑靶向给药等目的。本文拟从制剂处方前研究、体外透皮实验研究、鼻用原位凝胶剂的处方筛选以及制备工艺研究、制剂体外质量评价、体内药动学及生物利用度研究、脑靶向性研究以及鼻黏膜纤毛毒性评价等方面对CTH鼻用原位凝胶剂进行系统而深入的研究。
第一章CTH鼻用原位凝胶剂的处方前研究中，首先建立了专属性强、准确度好、精密度与灵敏度高的HPLC药物含量测定方法，然后分别完成了药物油水分配系数(P)、溶液的化学稳定性和不同溶剂对CTH溶解度的影响三个方面的研究。油水分配系数研究结果发现，当缓冲液pH≤5.0时，CTH的P值远远小于1，当缓冲液pH＞5.0时，随着pH的增大，P值逐渐增大；药物溶液化学稳定性研究结果表明，当pH≤8时，CTH溶液的化学稳定性较好；当pH＞8时，CTH溶液的化学稳定性开始下降，且随着介质pH值的增大而明显降低。溶解度研究中发现，CTH在不同溶剂中的溶解度大小顺序为：30%乙醇＞水＞环糊精衍生物＞聚乙二醇＞丙二醇＞吐温80。
第二章CTH的体外透皮实验研究中，采用离体羊鼻黏膜为模型，研究并比较了二甲基-β-环糊精(DM-β-CD)、磺基丁基醚-β-环糊精(SBE-β-CD)、羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)三种透皮吸收促渗剂对CTH的促渗作用以及促渗剂浓度对促渗作用效果的影响。研究结果表明，三种β-CD水溶性衍生物对CTH均有明显的促渗作用，其中DM-β-CD的促渗效果最好；且当DM-β-CD浓度为3.0%时，其促渗效果最佳。故选择3.0%DM-β-CD作为CTH鼻用原位凝胶剂的吸收促渗剂。
第三章CTH鼻用原位凝胶剂进行处方筛选及制备工艺的研究中，首先考察了卡波姆940(CP940)的加入对泊洛沙姆407(F127)空白凝胶处方黏度的影响，结果发现，CP940可明显增加F127凝胶处方的黏度。然后，采用星点设计-响应面法实验设计，以F127和CP940的质量浓度(w/v，%)为考察因素，以胶凝温度和胶凝时间为观察指标，筛选出空白原位凝胶的最佳处方组成为：20.27%F127，0.17%CP940。其次，采用单因素实验，考察了CTH的加入对空白原位凝胶胶凝温度的影响，结果发现，药物的加入可升高空白原位凝胶的胶凝温度。最后，综合CTH油水分配系数和溶液化学稳定性研究、CTH体外透皮实验研究结果，确定CTH鼻用原位凝胶剂的理性处方组成为：8.0%CTH，20.27%F127，0.17%CP940，3.0%DM-β-CD，0.05%尼泊金乙酯以及适量水，制剂的pH约为5.0。
第四章CTH鼻用原位凝胶剂的体外质量评价中，分别研究了该制剂的外观、pH、胶凝温度、胶凝时间、黏度、药物与防腐剂的含量、体外溶蚀率及体外释放度。结果发现，该制剂外观澄清透明，pH值约5.0左右，胶凝温度与胶凝时间分别为32℃与40s，粘度为150mPa?s，CTH及尼泊金乙酯的含量均在标示量的99.0%~101.0%之间。此外，CTH鼻用原位凝胶剂在55min时体外溶蚀率为92.0%，药物释放率为90.07%，且制剂的体外溶蚀与药物释放二者间存在明显线性相关(r=0.9993)。最后，在体外释放度实验中发现，CTH溶液释药速度很快，在2h内累积释药高达88.0%，而鼻用原位凝胶在相同时间累积释药不到50.0%，8h累积释药仅92.0%，表明该CTH鼻用原位凝胶具良好缓释效果。
第五章CTH鼻用原位凝胶剂的药动学及生物利用度中，首先建立了大鼠血浆中CTH浓度的HPLC-紫外检测方法；然后，以CTH溶液灌胃给药为参比，测定该药物鼻用原位凝胶剂鼻腔给药后在大鼠体内的血药浓度并计算主要药动学参数Tmax、Cmax、AUC以及相对生物利用度(Fr)等。结果发现，CTH鼻用原位凝胶剂的Tmax、Cmax及AUC0-∞分别为0.095h、2127.16ng?mL-1、1970.81ng?h?mL-1，而灌胃给药的Tmax、Cmax及AUC0-∞分别为0.791h、576.83ng?mL-1、1215.86ng?h?mL-1，不同给药途径之间有显著统计学差异(P＜0.05)。此外，求得CTH鼻用原位凝胶剂的Fr高达167.75%。上述结果表明，CTH经鼻腔给药，其吸收速度明显加快，生物利用度显著提高。
第六章CTH鼻用原位凝胶剂的脑靶向性进行了研究中，首先建立了大鼠脑组织中CTH浓度的HPLC-紫外检测方法；然后，以灌胃给药为参比，测定CTH鼻用原位凝胶剂鼻腔给药后在大鼠脑组织中药物浓度并计算主要药动学参数。结果发现CTH鼻用原位凝胶剂的Tmax为0.08h，Cmax为17660ng?g-1，AUC0-∞为17263.45ng?h?g-1，而灌胃给药的Tmax、Cmax和AUC0-∞分别为0.75h、1171.68ng?g-1和3735.05ng?h?g-1，二者之间有显著性统计学差异(P＜0.01)。此外，求得CTH鼻用原位凝胶剂脑靶向指数为2.50，表明该制剂具有明显脑靶向性。
第七章对CTH鼻用原位凝胶剂鼻黏膜纤毛毒性的研究中，采用蟾蜍上颚黏膜模型离体法和在体法评价其纤毛毒性。分别考察了CTH溶液、空白处方以及完整处方对鼻黏膜的纤毛毒性。结果表明，CTH溶液、完整处方以及空白处方对鼻黏膜纤毛均有一定的毒性，但这种毒性是可逆的。其中，CTH溶液和完整处方毒性相近，空白处方对纤毛毒性最小。
第一章CTH鼻用原位凝胶剂的处方前研究中，首先建立了专属性强、准确度好、精密度与灵敏度高的HPLC药物含量测定方法，然后分别完成了药物油水分配系数(P)、溶液的化学稳定性和不同溶剂对CTH溶解度的影响三个方面的研究。油水分配系数研究结果发现，当缓冲液pH≤5.0时，CTH的P值远远小于1，当缓冲液pH＞5.0时，随着pH的增大，P值逐渐增大；药物溶液化学稳定性研究结果表明，当pH≤8时，CTH溶液的化学稳定性较好；当pH＞8时，CTH溶液的化学稳定性开始下降，且随着介质pH值的增大而明显降低。溶解度研究中发现，CTH在不同溶剂中的溶解度大小顺序为：30%乙醇＞水＞环糊精衍生物＞聚乙二醇＞丙二醇＞吐温80。
第二章CTH的体外透皮实验研究中，采用离体羊鼻黏膜为模型，研究并比较了二甲基-β-环糊精(DM-β-CD)、磺基丁基醚-β-环糊精(SBE-β-CD)、羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)三种透皮吸收促渗剂对CTH的促渗作用以及促渗剂浓度对促渗作用效果的影响。研究结果表明，三种β-CD水溶性衍生物对CTH均有明显的促渗作用，其中DM-β-CD的促渗效果最好；且当DM-β-CD浓度为3.0%时，其促渗效果最佳。故选择3.0%DM-β-CD作为CTH鼻用原位凝胶剂的吸收促渗剂。
第三章CTH鼻用原位凝胶剂进行处方筛选及制备工艺的研究中，首先考察了卡波姆940(CP940)的加入对泊洛沙姆407(F127)空白凝胶处方黏度的影响，结果发现，CP940可明显增加F127凝胶处方的黏度。然后，采用星点设计-响应面法实验设计，以F127和CP940的质量浓度(w/v，%)为考察因素，以胶凝温度和胶凝时间为观察指标，筛选出空白原位凝胶的最佳处方组成为：20.27%F127，0.17%CP940。其次，采用单因素实验，考察了CTH的加入对空白原位凝胶胶凝温度的影响，结果发现，药物的加入可升高空白原位凝胶的胶凝温度。最后，综合CTH油水分配系数和溶液化学稳定性研究、CTH体外透皮实验研究结果，确定CTH鼻用原位凝胶剂的理性处方组成为：8.0%CTH，20.27%F127，0.17%CP940，3.0%DM-β-CD，0.05%尼泊金乙酯以及适量水，制剂的pH约为5.0。
第四章CTH鼻用原位凝胶剂的体外质量评价中，分别研究了该制剂的外观、pH、胶凝温度、胶凝时间、黏度、药物与防腐剂的含量、体外溶蚀率及体外释放度。结果发现，该制剂外观澄清透明，pH值约5.0左右，胶凝温度与胶凝时间分别为32℃与40s，粘度为150mPa?s，CTH及尼泊金乙酯的含量均在标示量的99.0%~101.0%之间。此外，CTH鼻用原位凝胶剂在55min时体外溶蚀率为92.0%，药物释放率为90.07%，且制剂的体外溶蚀与药物释放二者间存在明显线性相关(r=0.9993)。最后，在体外释放度实验中发现，CTH溶液释药速度很快，在2h内累积释药高达88.0%，而鼻用原位凝胶在相同时间累积释药不到50.0%，8h累积释药仅92.0%，表明该CTH鼻用原位凝胶具良好缓释效果。
第五章CTH鼻用原位凝胶剂的药动学及生物利用度中，首先建立了大鼠血浆中CTH浓度的HPLC-紫外检测方法；然后，以CTH溶液灌胃给药为参比，测定该药物鼻用原位凝胶剂鼻腔给药后在大鼠体内的血药浓度并计算主要药动学参数Tmax、Cmax、AUC以及相对生物利用度(Fr)等。结果发现，CTH鼻用原位凝胶剂的Tmax、Cmax及AUC0-∞分别为0.095h、2127.16ng?mL-1、1970.81ng?h?mL-1，而灌胃给药的Tmax、Cmax及AUC0-∞分别为0.791h、576.83ng?mL-1、1215.86ng?h?mL-1，不同给药途径之间有显著统计学差异(P＜0.05)。此外，求得CTH鼻用原位凝胶剂的Fr高达167.75%。上述结果表明，CTH经鼻腔给药，其吸收速度明显加快，生物利用度显著提高。
第六章CTH鼻用原位凝胶剂的脑靶向性进行了研究中，首先建立了大鼠脑组织中CTH浓度的HPLC-紫外检测方法；然后，以灌胃给药为参比，测定CTH鼻用原位凝胶剂鼻腔给药后在大鼠脑组织中药物浓度并计算主要药动学参数。结果发现CTH鼻用原位凝胶剂的Tmax为0.08h，Cmax为17660ng?g-1，AUC0-∞为17263.45ng?h?g-1，而灌胃给药的Tmax、Cmax和AUC0-∞分别为0.75h、1171.68ng?g-1和3735.05ng?h?g-1，二者之间有显著性统计学差异(P＜0.01)。此外，求得CTH鼻用原位凝胶剂脑靶向指数为2.50，表明该制剂具有明显脑靶向性。
第七章对CTH鼻用原位凝胶剂鼻黏膜纤毛毒性的研究中，采用蟾蜍上颚黏膜模型离体法和在体法评价其纤毛毒性。分别考察了CTH溶液、空白处方以及完整处方对鼻黏膜的纤毛毒性。结果表明，CTH溶液、完整处方以及空白处方对鼻黏膜纤毛均有一定的毒性，但这种毒性是可逆的。其中，CTH溶液和完整处方毒性相近，空白处方对纤毛毒性最小。