炎症是机体应对刺激时的一种防御反应,它是一把双刃剑,适度的炎症可以限制炎症扩散、清除坏死组织、恢复器官的功能。但持续的未消退的炎症反应会对机体产生损害,导致机体功能丧失,甚至威胁生命。炎症小体是由胞浆内模式识别受体参与组装的多蛋白复合物,目前有大量文献对NLRP3炎症小体进行了深入研究,发现它能够在许多危险信号或者病原微生物作用下发生活化,在多种人类疾病中都发挥了巨大的作用。因此,NLRP3炎症小体作为炎症反应的核心,对于它的研究可能为各种炎症相关的疾病提供新的治疗靶点。NF-κB是生物体内一种影响广泛的转录调节因子,而经典NLRP3炎症小体活化也依赖于NF-κB的作用。与嘌呤的结构类似的吡唑并[4,3-d]嘧啶结构,表现出了多种药理学活性,对机体的能量供应、合成辅酶以及调控代谢等过程都有着十分明显的影响。本研究工作基于对抗炎活动的虚拟筛选,通过计算机分子对接,发现并合成了一种新型吡唑并[4,3-d]嘧啶衍生物,有望成为改善炎症的新型先导化合物。课题先通过初步虚拟筛选将化合物筛选出来后,进行了较为系统的药理抗炎活性研究,初步揭示了该化合物可能的抗炎机制。研究用LPS刺激RAW264.7细胞来模拟体外细胞炎症模型。首先在显微镜下观察RAW264.7细胞的形态学变化,将加了化合物的实验组、模型组以及正常组来进行对比,初步判断该化合物是否有抗炎作用。然后用一氧化氮试剂盒通过Griess法来测定该化合物对LPS刺激的RAW264.7细胞中NO产生的影响。通过荧光定量Real-time PCR实验测定TNF-α、IL-6、IL-1β和COX-2 m RNA含量的变化。用蛋白质免疫印迹实验来测定COX-2蛋白、NF-κB信号通路蛋白以及NLRP3炎症小体相关蛋白表达量的变化,进而确认该化合物通过NF-κB/NLRP3炎症小体信号通路来发挥抗炎活性的初步机制。