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目的:
从临床患者胃黏膜上皮细胞中发现一种新的病毒--微小病毒,通过电镜、原位杂交技术排除已报道的与胃腺癌相关的EB病毒(EBV)、乙型肝炎病毒(HBV)、人类乳头瘤病毒(HPV),从而探讨研究微小病毒与胃腺癌病因学的相关性,为临床胃腺癌病因学的研究提供科学的实验依据。
方法:
1.胃镜下取标本由河南中医学院第一附属医院胃镜室协助完成,根据预试验观测结果在胃镜下选取慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、胃腺癌患者的胃黏膜。
2.将胃黏膜分三块,一块迅速用戊二醛做前固定,集中送石家庄电镜室做电镜指标观察;一块迅速用10%的甲醛固定;一块迅速移至细胞培养室超净操作台,做细胞的原代培养成活后进行传代培养,传代的细胞一部分继续培养使病毒复制繁殖,一部分放入冻存管液氮冻存备用。
3.甲醛固定的组织做常规病理石蜡包埋成蜡块,运用原位杂交技术排除EB病毒(EBV)、人类乳头瘤病毒(HPV)、乙型肝炎病毒(HBV)这三种病毒的可能性,因患者在做胃镜前已做镜前四项传染病检查,我们选取的都是HBV阴性的患者,进一步用原位杂交证实该种病毒不是EBV、HPV、HBV这三种病毒,而是一种新的病毒。
结果:
1.病理组织学结果对35例标本进行常规病理技术处理,HE染色结果表明病理诊断与临床诊断相符,我们取得标本证实为慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎及胃癌患者的胃黏膜。
2.电镜指标观测结果我们选取了35例标本送往石家庄河北医科大学电镜室做电镜观察,发现其中的9例标本中有微小病毒的颗粒存在,该颗粒直径非常小,只有放大十万倍左右才可以看清,该颗粒无外壳而且常聚团存在,符合电镜下微小病毒的形态特征。
3.细胞培养结果成功的完成了胃黏膜上皮细胞的原代、传代培养。细胞生长良好,并进行了冻存。
4.原位杂交检测结果原位杂交实验结果显示,所做的9例标本中EBV、HPV、HBV检测均成阴性。这就排除了电镜下观察的病毒颗粒为HBV、EBV、HPV这三种病毒的可能性,可能为一种新的病毒。
结论:
1.35例胃黏膜上皮细胞中有9例标本中找到了微小病毒颗粒;
2.排除了国内外已经报道证实的与胃腺癌有关的EB病毒、乙型肝炎病毒、人类乳头瘤病毒;
3.成功的完成了胃黏膜上皮细胞的原代及传代培养,为该实验更深一步的研究做好了准备。