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同型半胱氨酸(HomocysteiRe,HCY)是一种含硫氨基酸的代谢产物,血浆中同型半胱氨酸水平升高被认为是高同型半胱氨酸血症(Hyperhomocysteinemia,HHcy)。虽然许多研究认为血浆中同型半胱氨酸的升高与肝功能损伤有直接关系,但其机理还不清楚;同型半胱氨酸血症与神经退行性疾病像Alzheimer氏症、Parkinson氏症、中风等疾病也有关系,但目前仅见关于同型半胱氨酸对神经元毒性的研究,而关于同型半胱氨酸对小胶质细胞影响的研究未见报道。
本文主要对同型半胱氨酸对肝细胞及小胶质细胞生长的影响进行研究,主要研究结果为:
1.同型半胱氨酸抑制肝细胞生长及引起肝细胞周期G1期停滞同型半胱氨酸处理原代培养肝细胞及HepG2后,细胞周期G1期停滞,并且p53的蛋白水平及p21的mRNA、蛋白水平升高;然而同型半胱氨酸对p53缺陷型细胞株Hep3B的细胞周期却无影响。同时p53抑制剂-pifithrin-α-能抑制同型半胱氨酸引起的HepG2细胞周期停滞及p21的表达升高。同型半胱氨酸通过内质网应激途径引起TRB3表达升高。干扰TRB3后可以显著抑制同型半胱氨酸引起的细胞周期停滞和Akt磷酸化水平降低。LiCl通过提高Akt的磷酸化水平而抑制同型半胱氨酸引起的细胞周期停滞效应。同时我们发现,高同型半胱氨酸血症小鼠肝组织中TRB3表达量升高。
以上结果说明,同型半胱氨酸通过内质网应激途径引起肝细胞周期G1期停滞,TRB3表达升高和Akt磷酸化水平降低在这个过程中起到关键作用。
2.同型半胱氨酸诱导小胶质细胞增殖并使其激活同型半胱氨酸诱导小胶质细胞增殖,并诱导小胶质细胞激活标志物OX42的表达升高。OX42免疫组化显示,高蛋氨酸食物喂养的小鼠大脑海马区OX42阳性小胶质细胞明显比对照组多。同型半胱氨酸通过激活NAD(P)H氧化酶使小胶质细胞胞内ROS水平升高;而抑制ROS水平升高可以抑制同型半胱氨酸诱导的小胶质细胞增殖与激活效应。同时我们发现,同型半胱氨酸是通过p38 MAPK调控p47phox磷酸化水平升高从而使NAD(P)H氧化酶活性升高的。
以上结果说明,同型半胱氨酸激活p38 MAPK及NAD(P)H氧化酶,从而使ROS水平升高,进而诱导小胶质细胞增殖并使其激活。
1.首次报道同型半胱氨酸可以诱导肝细胞生长停滞并研究了其分子机理,为阐明同型半胱氨酸对肝脏的影响提供重要科学依据;
2.首次报道同型半胱氨酸诱导小胶质细胞增殖,为阐明同型半胱氨酸在神经退行性疾病致病过程中的作用提供重要依据。