论文部分内容阅读
蝙蝠是多种病毒的自然宿主，其中一些病毒是人畜新发传染病的病原。然而自然携带或人工感染病毒的蝙蝠并不表现出临床症状，其中机制未知。近期对两种蝙蝠基因组序列分析结果提示，蝙蝠可能具有一些独特的先天性免疫机制。本文在前期研究基础上，用定量PCR技术分析病毒感染后蝙蝠干扰素及其诱导基因的应答水平;表达鼠耳蝠Ⅰ型干扰素和干扰素诱导蛋白，测试蝙蝠干扰素在不同来源的细胞中对病毒的抑制作用，试图初步了解病毒诱导的蝙蝠先天性免疫应答机制。
本研究主要内容包括：⑴克隆和表达了鼠耳蝠Ⅰ型干扰素IFNβ，并对其进行了抗病毒活性研究。序列分析表明IFNβ与莹鼠耳蝠的同源性最高，核苷酸相似性为93％，氨基酸序列同源性为85％，与其他五种大蝙蝠、小蝙蝠、人和鼠的IFNβ相比，干扰素受体结合区域相对保守。鼠耳蝠IFNβ原核表达产物主要以包涵体形式存在，大小约为21kDa，抗病毒活性测定结果表明鼠耳蝠IFNβ具有跨种保护作用，在鼠耳蝠肾细胞和菊头蝠肾细胞上均对腺病毒和水疱性口炎病毒的复制有抑制效果。⑵检测了仙台病毒、蝙蝠腺病毒、人腺病毒、新甲流病毒和辛德毕斯病毒等感染鼠耳蝠肾细胞后IFNβ的应答，结果表明只有仙台病毒和蝙蝠腺病毒能够诱导产生IFNβ。利用Realtime PCR的方法，检测了两种腺病毒感染后Ⅰ型和Ⅲ型干扰素及干扰素刺激基因ISGs的mRNA水平，Ⅰ型干扰素和Ⅲ型干扰素以及干扰素刺激基因ISG54、ISG56表达水平都明显升高，但人腺病毒感染后IFNβ并没有检测到，这表明蝙蝠感染不同种腺病毒干扰素应答反应有所差异。⑶扩增了大卫鼠耳蝠Mx1基因，序列分析发现，鼠耳蝠Mx1片段大小为1.97kb。与其他物种间序列一致性在76％-98％之间。该基因具有典型的发动家族特征序列、GTP结合区以及GTP酶效应区，表明该基因所表达的蛋白质具有抗病毒活性。