MeJA对三七皂苷合成的调控及FPS基因转化烟草的初步研究

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本文以三七[Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen]体细胞胚为悬浮培养材料,主要采用qRT-PCR方法和高效液相分析方法,研究了 MeJA对三七体细胞中胚皂苷合成及其合成相关的4种关键酶基因:法尼基焦磷酸合成酶(FPS)、鲨烯合成酶(SS)、鲨烯环氧酶(SE)、环阿屯醇合成酶(CAS)基因表达的影响;并利用植物基因工程技术,构建了FPS基因植物表达载体,通过农杆菌介导法将其转入烟草细胞。具体结果如下:1.50~500 μmol/L MeJA处理三七悬浮体细胞胚7 d,其中50 μmol/L MeJA处理三七悬浮体胚时,3种人参皂苷(Rg1、Re及Rb1)的总含量达到最大值8.89 mg/g,3种人参皂苷的总积累效率亦同时达到最大值0.4622 mg/g/d。随着MeJA浓度的增加,3种人参皂苷的总含量逐渐减少,在500μmol/L MeJA处理时达到最小值3.72 mg/g,总积累效率亦同时达到最小值0.0301 mg/g/d。三七悬浮体胚中人参皂苷Rg1、Re及Rb1的含量在以50 μmol/L MeJA处理时达到最大值(依次为1.65、0.96、6.28 mg/g),总积累效率亦同时达到最大值(依次为0.0858、0.0497、0.3266 mg/g/d)。随着MeJA浓度的增加,人参皂苷Rg1、Re及Rb1的含量均减小,在MeJA浓度为500μmol/L时达到最小值(0.28、0.16和3.29 mg/g)。2.FPS、SS及SE基因的相对表达量在50 μmol/L MeJA处理时均达到最大值,分别是对照的3.23、2.05、4.26倍,然后随MeJA浓度的增加而降低;MeJA处理后,CAS基因的相对表达量与对照显著降低。3.经50μmol/L MeJA诱导后,3种人参皂苷的总含量呈现出先增加后减少的趋势,在MeJA处理7 d后达到最大值8.89 mg/g。人参皂苷Rg1和Re的含量随诱导时间的增加而逐渐上升,均在10 d后达到最大值(分别为2.12 mg/g和1.39 mg/g);而人参皂苷Rb1的含量随诱导时间的增加呈现先增后减的趋势,并一直维持在较高水平,诱导7 d后达到最大值6.29 mg/g,为同期对照的6.45倍。4.FPS基因的表达水平随诱导时间的增加而增加,在MeJA诱导10 d时其表达水平是对照的1.70倍。与对照相比,SS基因和SE基因的表达水平显著提高,在MeJA诱导7 d时其相对表达水平达到最大值,分别为对照的4.95和2.45倍。在MeJA处理后,CAS基因的表达水平与对照略有下降。5.构建FPS基因植物表达载体,利用农杆菌介导法转化烟草叶片,并通过PCR确认转入烟草植株。
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