论文部分内容阅读
本论文共分为三部分: 第一章我们通过双酶催化荧光分光光度计的方法实现了对葡萄糖的定量测定。我们运用了酶对底物的高选择性,GOD-HRP-ADHP反应体系催化无荧光的底物ADHP生成有荧光产物试卤灵的原理,葡萄糖被葡萄糖氧化酶(Glucose Oxidase,GOD)催化生成过氧化氢(H2O2),过氧化氢和10-乙酰基-3,7,二羟基吩嗪(10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine,ADHP)在过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)催化下产生荧光产物试卤灵。在此基础上,对激发波长、GOD的比活力、HRP的比活力、孵育时间等方面进行了最佳实验条件的讨论;最后在最佳实验条件下确定了双酶催化荧光底物检测葡萄糖的标准曲线、线性范围和检测限。 第二章中,我们研究了利用细胞信号转导机制实验了对胰高血糖素的定量检测。方法原理是:当胰高血糖素与细胞膜上专一性的蛋白质受体结合后,细胞膜上与受体偶联的腺苷酸环化酶催化ATP分解为cAMP和焦磷酸。由于细胞内cAMP浓度增高,最终引起糖原分解,使磷酸葡萄糖的含量急剧增加,以葡萄糖的形式释放到细胞外。再通过双酶(GOD-HRP-ADHP)催化反应测定肝细胞释放的葡萄糖测定溶液中的胰高血糖素的浓度。较高的细胞密度可以获得较高的信号放大倍数。以细胞密度为1.0×106个/mL的细胞的反应体系作为细胞传感器时,胰高血糖素的浓度信号被放大了约50倍。 第三章中,我们利用细胞信号转导和通讯机制实现了对皮质醇的定量检测。首先确定了胰高血糖素的标准溶液的标准曲线、线性范围和检测限。基于此我们利用皮质醇-胰腺细胞之间的信号通讯实现了对皮质醇的定量检测;然后运用皮质醇-胰腺细胞-肝细胞体系间的信号转导和通讯,通过检测最终释放出来的葡萄糖的量确定了皮质醇的标准曲线、线性范围和检测限。在这个过程中,皮质醇的信号被放大了134倍。