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海滨雀稗(PaspalumvaginatumSw.)是禾本科(Gramineae)黍族(Paniceae)雀稗属(Paspalum)的多年生草本植物,具有较强的耐盐能力,较高的耐干旱、耐涝、耐贫瘠、耐荫性和耐磨损性。但与常用的暖季型草坪草狗牙根、结缕草相比,海滨雀稗绿期短且抗寒性较差。因此,培育抗寒型海滨雀稗新种质,对华东沿海地区城市绿化和滩涂生态环境建设具有重要的实践意义。与传统育种手段相比,现代生物技术育种可大大缩短育种周期,提高育种效率,而建立高效的再生体系是进行海滨雀稗遗传转化和体细胞突变体筛选的先决条件。本研究以海滨雀稗(Pvaginatum)Seaspary的成熟种子为外植体,运用正交试验设计和单因素试验相结合,以MS为基础培养基,添加不同浓度的2,4-D、6-BA、NAA、KT、CuSO4、AHC等外源物质,分析其对愈伤组织诱导、胚性愈伤组织分化的影响,从而建立海滨雀稗高频再生体系,为基因工程育种奠定基础;在建立海滨雀稗高频再生体系的基础上,以胚性愈伤组织为材料,分别进行2℃和6℃的低温诱导和筛选,并分化成再生植株;对再生植株进行15℃/10℃和5℃/3℃(昼/夜)的低温胁迫,观察草坪质量并测定其它生理指标,评价低温下经过筛选的再生植株的耐寒能力。本研究主要结果如下: 1.通过研究不同消毒时间对成熟种子发芽率、愈伤组织诱导率及胚性愈伤组织诱导率的影响,确定最佳的消毒时间为30min。 2.通过2,4-D、6-BA、CuSO4、AHC4因素4水平的正交试验设计,确定的最佳发芽培养基为2,4-D2.0mg/L+AHC0.5g/L,其发芽率为97.50%;最佳愈伤组织诱导培养基为2,4-D3.0mg/L+CuSO410.0mg/L,出愈率为97.50%;最佳胚性愈伤组织诱导培养基为2,4-D3.0mg/L+CuSO415.0mg/L+AHC1.0g/L,胚性出愈率可达66.88%。 3.通过单因素的试验确定最佳的继代培养基为MS+2,4-D3.0mg/L+KT0.1mg/L。 4.通过6-BA、KT、CuSO4、NAA4因素4水平的正交试验设计,确定最佳的分化培养基为MS+6-BA8.0mg/L+KT0.05mg/L+CuSO410.0mg/L+NAA0.5mg/L,其分化率为95.00%。 5.以海滨雀稗的胚性愈伤组织为材料,经2℃和6℃低温诱导和筛选后,除处理90d的胚性愈伤组织外,均得到了再生植株。 6.2℃下培养45d、60d的再生植株经15℃/10℃和5℃/3℃的低温胁迫,测定叶片草坪质量(TQ)、电解质渗漏(EL)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)及丙二醛(MDA)等各项生理指标的变化。研究结果表明,2℃下培养45d、60d的再生植株抗寒性均有一定程度的提高,且2℃培养60d的再生植株抗寒性较强。