质谱法探究UBIAD1蛋白对HRAS蛋白的修饰

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UBIAD1编码含有338个氨基酸,组成分子量为36.8kd的膜蛋白。UBIAD1与人类的多种疾病有相关,例如癌症、施耐德结晶状角膜营养不良症、心血管疾病和帕金森等症。基于以前的研究,发现UBIAD1蛋白会和HRAS蛋白相互作用,且UBIAD1蛋白可以引起T24细胞的凋亡,但是,至今关于UBIAD1蛋白如何引起细胞凋亡的分子机制尚未研究清楚,推测UBIAD1蛋白会对HRAS蛋白有修饰的作用。  应用液质联用电喷雾质谱仪,对来自实验设计中不同样品纯化后的HRAS蛋白,酶解处理进行质谱分析。分析结果显示成功的鉴定出了HRAS蛋白。大肠杆菌原核表达的HRAS蛋白可以作为空白参照,酶解多肽不含任何翻译后修饰。同时,对比了UBIAD1蛋白敲低组和正常组后发现,敲低组的F-CVLS(M/Z=625.6)含量明显多于正常组,这表明CVLS(M/Z=421.5)可能通过UBIAD1蛋白的修饰转变为其他形式的多肽序列。此外,病变组T24细胞中纯化的HRAS蛋白也同样得到这一结论。综上所述,UBIAD1蛋白的下调或者上调,可以显著的导致法尼基化的HRAS增多或者减少。
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