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目的:以Pirt-TRPV1通路为切入点,观察针刺对大鼠脊髓背根神经节神经元Pirt和结肠黏膜TRPV1表达的影响,研究针刺缓解腹泻型肠易激综合征(diarrheapredominant irritable bowel syndrome,IBS-D)内脏高敏感与Pirt-TRPV1通路之间的关系,探索针刺缓解IBS-D内脏高敏感的作用机制,为针刺治疗IBS-D提供一定的科学依据。方法:选用清洁级健康成年Sprague Dawley(SD)大鼠,共40只,雌雄各半。适应性喂养7天后,进行造模前行为学评价,剔除不符合条件的大鼠后,按体重分层,采用抽签法随机分为对照组、模型组、模型+针刺组(以下简称针刺组)和模型+药物组(以下简称药物组)。模型组、针刺组和药物组采用慢性不可预知性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)联合番泻叶浸剂灌胃的方法建立IBS-D大鼠模型。造模14天后,进行模型判定,再次剔除不符合条件的大鼠,然后开始14天的干预:针刺组每天左右交替针刺双侧天枢、足三里、三阴交和太冲穴,每次电针刺激15分钟,每天1次;药物组采用浓度为2.7mg/mL的匹维溴铵混悬液按10mL/kg灌胃给药。干预结束后,进行行为学评价。以腹壁撤退反射(abdominal withdrawal reflex,AWR)实验测得的疼痛阈值评价各组大鼠内脏敏感性的变化,以腹泻指数反映大鼠腹泻程度的变化,以高架十字迷宫开臂时间比(open arm time percent,OT%)和糖水偏嗜率(sucrose preference,SP%)分别反映大鼠焦虑和抑郁样行为的变化。行为学评价后,取各组大鼠的脊髓背根神经节和结肠,通过免疫组化法检测神经元Pirt和结肠黏膜TRPV1的表达。结果:1.一般情况造模前,对照组、模型组、针刺组和药物组大鼠的进食量和体重均无显著性差异(P>0.05,P>0.05)。造模后与造模前比较,对照组的进食量无明显差异(P>0.05),体重增长明显(P<0.01);模型组、针刺组和药物组的进食量明显减少(P<0.01),体重增长缓慢(P>0.05)。干预后与造模后比较,对照组的进食量无明显差异(P>0.05),体重增长明显(P<0.01);模型组进食量差异无统计学意义(P>0.05),体重明显减轻(P<0.01);针刺组和药物组的进食量明显增多(P<0.01),体重明显升高(P<0.01)。造模后,与对照组比较,模型组、针刺组和药物组的进食量明显减少(P<0.01),体重增长缓慢(P>0.05);干预后,与模型组比较,针刺组和药物组的进食量明显增多(P<0.01),体重明显升高(P<0.01)。2.内脏敏感性造模前,对照组、模型组、针刺组和药物组大鼠的疼痛阈值均不具有显著性差异(P>0.05)。对照组的疼痛阈值在造模前、造模后及干预后均无明显差异(P>0.05);造模后与造模前比较,模型组、针刺组和药物组疼痛阈值明显降低(P<0.01);干预后与造模后比较,模型组疼痛阈值无统计学差异(P>0.05),针刺组和药物组明显升高(P<0.01)。造模后,与对照组比较,模型组、针刺组和药物组的疼痛阈值均明显降低(P<0.01),内脏敏感性均明显升高;干预后,与模型组比较,针刺组和药物组的疼痛阈值均明显升高(P<0.01),内脏敏感性均明显降低。3.腹泻程度造模前,对照组、模型组、针刺组和药物组大鼠腹泻指数均为0。对照组在造模前、造模后及干预后均无腹泻情况,腹泻指数均为0;造模后与造模前比较,模型组、针刺组和药物组的腹泻指数均明显升高(P<0.01);干预后与造模后比较,模型组腹泻指数差异无统计学意义(P>0.05),针刺组和药物组明显下降(P<0.01)。造模后,与对照组比较,模型组、针刺组和药物组的腹泻指数均明显升高(P<0.01);干预后,与模型组比较,针刺组和药物组的腹泻指数均明显降低(P<0.01)。4.焦虑抑郁样行为造模前,对照组、模型组、针刺组和药物组大鼠的OT%和SP%均不具有显著性差异(P>0.05,P>0.05)。对照组在造模前、造模后及干预后,OT%和SP%均无显著性差异(P>0.05,P>0.05);造模后与造模前比较,模型组、针刺组和药物组的OT%和SP%均明显下降(P<0.01,P<0.01);干预后与造模后比较,模型组OT%和SP%差异均无统计学意义(P>0.05,P>0.05),针刺组和药物组明显升高(P<0.01,P<0.01)。造模后,与对照组比较,模型组、针刺组和药物组的OT%和SP%均显著降低(P<0.01,P<0.01);干预后,与模型组比较,针刺组和药物组OT%和SP%均显著升高(P<0.01,P<0.01)。5.Pirt 和 TRPV1与对照组比较,模型组大鼠脊髓背根神经节神经元Pirt的平均光密度值显著增高(P<0.01);与模型组比较,针刺组和药物组Pirt的平均光密度值显著降低(P<0.01)。与对照组比较,模型组大鼠结肠黏膜TRPV1的平均光密度值显著增高(P<0.01);与模型组比较,针刺组和药物组TRPV1的平均光密度值显著降低(P<0.01)。结论:1.针刺天枢、足三里、三阴交及太冲穴可有效缓解IBS-D大鼠的内脏高敏感,减轻腹痛、腹泻程度,改善焦虑抑郁样行为,是治疗IBS-D的有效途径之一。2.Pirt-TRPV1通路可能是IBS-D内脏高敏感形成的机制之一,针刺可能是通过抑制Pirt-TRPV1通路,以缓解IBS-D的内脏高敏感,从而发挥治疗作用。