蛋白质组学指引下的自噬接头蛋白P62/SQSTM1诱导葡萄膜黑色素瘤和神经胶质瘤恶性进展的实验研究

来源 :苏州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:woyingla
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背景与目的:随着肿瘤研究的深入,对共生于同一机体内的肿瘤细胞(Tumor cell,TC)和TC所在的肿瘤微生态环境(tumor microenvironment,TME)之间关系的认识正在不断加深。在初始阶段,TC被寄生地免疫细胞攻击的同时,前者也对寄生地组织进行组织重构。这种重构实际上还包括对攻击TC的免疫细胞进行改造。一旦改造成功,TC不但可以生存,而且获得了恶性进展的潜能。目前对TC在TME中获得恶性进展的分子机制尚未完全阐明,特别是在此进程中起关键作用的靶分子仍有待深入揭示。本文蛋白质组学分析旨在筛选TME诱导TC恶性进展的关键蛋白分子,为研究既能靶向TC又能针对TME双向治疗的靶分子提供实验依据。材料与方法:①葡萄膜黑色素瘤92.1细胞于裸小鼠球后接种,致瘤后取肿瘤组织,制备原代单细胞体外培养,单克隆高增殖力细胞,进行相关分子生物学检测②iTRAQ/TMT蛋白全定量分析及目标蛋白筛选和验证③基于蛋白质组学分析结果,从TCGA肿瘤基因数据库中筛选与关键功能蛋白密切相关基因,在胶质瘤临床手术标本以及胶质瘤细胞系进行验证。结果与分析:①92.1细胞经眼球后接种,早期在受体动物葡萄膜附近组织生长,中期局限在眼眶内、晚期肿瘤侵及眼眶外、颅内、肺和肾脏,动物模型制备达到了葡萄膜黑色素瘤原位接种模型的要求。②从92.1眶内实体移植瘤组织中成功单克隆到一株高增殖力细胞(92.1B),经相关细胞和分子生物学检测及致瘤实验,证实这株细胞的肿瘤生物学特性比其亲本的92.1细胞更强。③从92.1、92.1B和92.1A(源于92.1裸鼠脑室异位移植瘤单克隆再培养所得到的比92.1恶性表型更强的细胞)三株细胞iTRAQ/TMT蛋白质全定量分析中筛选到三个靶分子:P62/SQSTM1、CDK1和CASP3。生物信息学分析提示其为调控92.1恶性进展的关键蛋白分子,发现P62/SQSTM1与诱导Nanog、SOX2、OCT4等多能干细胞基因表达上调以及GBP1的高表达相关,且与临床患者预后相关。结论与展望:①人葡萄膜黑色素瘤异种原位移植动物模型优于纯动物(鼠黑色素瘤细胞在鼠或兔体内移植瘤模型)的模拟性,因动物眼球太小,在制作上存在一定困难,在葡萄膜黑色素瘤研究领域,本研究首次报告建立自发绿色荧光蛋白示踪TME的受体动物模型,建模所用细胞为长期体外传代的细胞系,为了避免长期传代有可能带来的体外分子变异,拟进一步制备源于临床新鲜人葡萄膜黑色素瘤手术标本的异种原位移植动物模型。②iTRAQ/TMT蛋白质全定量分析可用于癌症分子机制研究,本文首次报告在TC和TME关联研究中,发现P62/SQSTM1、CDK1和CASP3为TME诱导TC恶性进展的关键蛋白,尚需深入研究P62/SQSTM1、CDK1和CASP3三者之间在TME诱导TC恶性进展的调控上是否存在因果关系,以及敲低表达或使用抑制剂后TC是否出现良性转化。③GBP1在胶质瘤中促进肿瘤细胞侵袭,本研究报告了 GBP1表达与胶质瘤恶性进展以及临床患者预后的相关性,P62/SQSTM在GBP1通路中的作用值得继续研究。
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