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目的：通过对Vav1与肿瘤浸润T淋巴细胞（tumor infiltrating T lymphocytes，TIL-T）活性的研究，提出肿瘤诱导的T细胞失能的分子机制；初步探讨TIL-T中Vav1基因的表达情况及其与肿瘤局部微环境中吲哚胺2，3双加氧酶（indoleamine-2，3-dioxygenase，IDO）的表达的相关性，提出肿瘤诱导的T细胞失能的一个可能的分子机制；分析IDO对T细胞活性、Vav1基因和蛋白表达水平，Vav1蛋白磷酸化及其下游信号分子[Ca2+]流、MAPK、NF-κB等的影响，同时测定IL-2基因的表达水平。提出TIL-T中Vav1信号异常的可能机制；提出调控TIL-T活性的方法，为纠正肿瘤诱导的免疫抑制提供新的解决方法。内容：1)检测TIL-T中Vav1 mRNA的表达水平，分析其与T细胞活性、肿瘤局部IDO表达水平的相关性。2)体外以稳定表达IDO的CHO细胞与T细胞共孵育，观察IDO对T细胞增殖、凋亡的影响，以及对Vav1基因、蛋白表达及Vav1蛋白活化的作用；观察IDO对T细胞中Vav1下游信号主要传导途径[Ca2+]流、MAPK及NF-κB的变化。探讨IDO在调控Vav1表达和活化中的作用，以及Vav1进一步调节T细胞活性的机制。3)将IDO抑制剂1-甲基色氨酸（1-MT）加入共孵育体系，观察T细胞增殖、凋亡以及Vav1信号途径的变化。方法：1)无菌条件下分离肺癌原位TIL-T及恶性胸腹水中的T淋巴细胞，在体外加入刺激活化因子，观察T淋巴细胞对刺激的反应性，同时检测T细胞中Vav1基因的表达水平；再用免疫组化的方法观察肺癌原位肿瘤组织中IDO蛋白的表达情况。2)体外以稳定表达IDO的CHO细胞株与外周血正常T细胞共同培养，MTT法检测T淋巴细胞的增殖率，流式细胞仪检测T细胞凋亡，Real-time PCR法检测Vav1和IL-2 mRNA水平，Western blot免疫印迹和免疫沉淀的方法检测Vav1蛋白表达及磷酸化水平，及其下游分子ERK1／2、p38和IκBα的活化；应用细胞钙离子成像系统检测单细胞内[Ca2+]i的动态变化。3)以IDO抑制剂1-MT加入共孵育体系，观察T细胞增殖、凋亡以及Vav1基因蛋白表达水平和下游信号途径的变化。结果：1)在11例肺癌患者肿瘤原位手术标本中，3例TIL-T对活化刺激信号的反应性低下，只表现为极微的增殖反应；其余8例TIL-T对刺激信号的反应正常，可正常增殖。同样用刺激活化信号在体外对10例癌症患者癌性胸腹水中T淋巴细胞进行激活，我们观察到，所有病例所采集的T细胞均能正常增殖。2)利用Real-time PCR的方法对肺癌原位TIL-T和癌性胸腹水中分离得到的T淋巴细胞中Vav1的mRNA含量进行了检测，结果显示可分为两组：对刺激信号反应正常的8例肺癌原位TIL-T和癌性胸腹水中的T细胞中，Vav1 mRNA含量与正常对照差异无统计学意义（P＞0.05）。而3例表现为“失能”状态的T细胞中Vav1的mRNA水平却非常低（P＜0.05）。3)免疫组化检测显示所观察的肺癌患者标本中IDO阳性表达率为27.3％，肺癌原位组织及转移性淋巴结中IDO表达呈一致性。3例IDO表达阳性的肺癌组织，其中浸润T淋巴细胞中Vav1基因表达水平较对照组下降；8例IDO表达阴性的肺癌组织Vav1基因表达水平与对照组的差异无统计学意义（P＞0.05）。IDO表达阳性的3例标本中TIL-T对活化刺激信号的反应性低下。4)稳定表达IDO的CHO细胞株经检测稳定表达IDO mRNA和蛋白，表达的IDO经氨基酸检测分析可分泌至细胞外并且发挥活性；将此细胞与T细胞共孵育后，T细胞增殖下降，凋亡增加；Vav1 mRNA及蛋白水平下降，磷酸化水平降低，而且Vav1下游分子的活化水平均降低；同时IL-2基因的表达下降。5) 1-MT加入共孵育体系后，T细胞增殖及凋亡均可部分恢复，Vav1 mRNA及蛋白水平也可部分恢复。结论：1) Vav1基因的表达与肿瘤局部浸润的T淋巴细胞的活性具有相关性，与肿瘤局部微环境中IDO的表达水平具有相关性。部分肺癌原位肿瘤局部浸润的T淋巴细胞呈现为功能抑制状态，在这些“失能”细胞中信号传导蛋白Vav1的表达下降。免疫组化结果提示IDO可能是肿瘤局部微环境中影响T细胞中Vav1蛋白表达和活化的重要因素之一。2) IDO抑制T细胞增殖，诱导T细胞凋亡。IDO对TCR信号传导通路具有调节作用。IDO及其代谢产物可能通过抑制T细胞中信号传导蛋白Vav1及其下游分子的表达和活化而抑制T细胞功能。3) Vav1的低表达和活化障碍，导致其下游分子的活化障碍，以致IL-2因子的合成和分泌减少，使T细胞增殖抑制。Vav1的下调与T细胞的凋亡是否有关仍需进一步探索。4) Vav1信号通路在IDO诱导的T细胞凋亡中的作用尚需进一步探索。本研究为进一步探讨IDO在病理或生理情况下对T细胞的抑制作用提供了另一个研究方向，初步探索了调控肿瘤局部T淋巴细胞功能的方法，同时为抗肿瘤免疫治疗方法的发展提供了新的治疗方法。