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目的: 急性髓系白血病(Acute Myeloid Leukemia，AML)是成人最常见的急性白血病，是致命的血液系统肿瘤。随着癌变造血祖细胞的无限增殖、比例变大，正常的造血功能明显不足，且临床表现多样。尽管在药物化疗方面取得了巨大进展，AML患者的复发率还是居高不下，总体5年生存率仍然很差，约为30％-40％。白血病细胞发生化疗耐药是治疗效果不理想，导致不良结局的主要原因。因此，AML患者的治疗需要替代疗法，需要寻找新的治疗靶位。 microRNA（miRNA）是一类在物种间高度保守的非编码短链RNA，大小约为19-25个核苷酸。miRNA可以作用于靶基因mRNA的3UTR非翻译区，在转录后水平负向调控基因的表达，导致mRNA的降解或者抑制其翻译。研究表明，很多miRNA在AML患者体内表达异常，并参与了AML的发病和疾病进展。本研究的目的是了解miR-495在AML患者体内的表达情况，及其对人类白血病细胞系HL-60细胞增殖和凋亡的影响。 方法: 1.从2015年3月到2016年4月期间在河南省人民医院收集了22例血液科AML患者的骨髓细胞标本作为病例组，收集妇产科22例健康足月婴儿顺产时的脐血标本作为对照组，分离单个核细胞后，于-80℃条件下储存。 2.对病例组和对照组标本进行qRT-PCR检测，观察miR-495和Bmi-1mRNA的表达情况，并用SPSS21.0对病例组miR-495和Bmi-1mRNA的表达水平进行Pearson相关性分析。 3.合成miR-495mimic和miR-495scramble，用脂质体转染方法将二者分别转染进入人类白血病细胞系HL-60细胞中。转然后细胞分为三组:miR-495组，转染miR-495mimic;NC组，转染miR-495scramble;Blank组，仅加入脂质体。 4.用CCK-8方法对三组细胞进行增殖影响检测，观察在HL-60细胞中上调miR-495的表达对其增殖的影响。 5.用流式细胞术对三组细胞进行凋亡检测，观察上调miR-495的表达对HL-60细胞凋亡率的影响。 6.用Targetscan和MicroCosm生物信息学网站对miR-495的靶基因进行分析预测。 7.构建包含Bmi-13UTR区的野生型与突变型的双报告基因重组载体，将其与miR-495mimic或miR-495scramble共转染入人类白血病细胞系HL-60细胞中，对荧光素酶的活性进行检测。 8.合成si-Bmi-1和si-NC，用脂质体转染方法将其转染入HL-60细胞中，将转染si-Bmi-1的细胞作为si-Bmi-1组;将转染si-NC的细胞作为si-NC组。 9.分别用qRT-PCR和Western blot对Blank组，miR-495组，NC组，si-Bmi-1组和si-NC组进行Bmi-1mRNA和其蛋白相对表达量的检测。 10.用CCK-8和流式细胞术方法分别对5组细胞进行细胞增殖情况和凋亡率的检测，探究miR-495对Bmi-1表达调控的作用。 结果: 1.AML患者骨髓细胞中miR-495的表达水平明显低于对照组脐血标本(P＜0.05)，病例组Bmi-1mRNA的表达水平明显高于对照组脐血标本(P＜0.05)，并且病例组miR-495的表达水平与Bmi-1mRNA的表达水平呈显著负相关，相关系数为r=-0.746(t=-5.01，P＜0.01)。 2.CCK-8方法实验结果显示，miR-495组HL-60细胞在24h、48h、72h、96h的450nm吸光度值显著低于Blank组和NC组(P＜0.05)。 3.流式细胞术检测细胞凋亡结果显示，与Blank组和NC组相比，miR-495组HL-60细胞的凋亡率增高，且差异有统计学意义(P＜0.05)。 4.双荧光素酶报告实验结果表明，Bmi-1是miR-495作用的靶标。 5.转染si-Bmi-1后的CCK-8实验结果表明，si-Bmi-1组细胞在24h、48h、72h、96h处的450nm吸光度值均低于Blank组、NC组和si-NC组，且差异具有显著性(P＜0.05)，而和miR-495组没有显著差异(P＞0.05）。 6.转染si-Bmi-1后的流式细胞术结果显示，si-Bmi-1组HL-60细胞的凋亡率显著高于Blank组、NC组和si-NC组(P＜0.05)，其与miR-495组的凋亡率没有显著差异(P＞0.05)。 结论: 1.急性髓系白血病患者骨髓细胞中miR-495的表达水平异常下降，Bmi-1的表达水平异常升高。 2.在人类白血病细胞系HL-60细胞中异常表达升高的miR-495通过靶向作用于Bmi-1负向调控Bmi-1的表达，从而抑制白血病细胞的生长，并促进白血病细胞的凋亡。