弓形虫主要表面抗原P30及霍乱毒素A<,2>/B复合基因在昆虫细胞中的表达

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关于弓形虫亚单位疫苗的研制国内大多停留在P30单价亚单位疫苗上,目前国内外均未见P30基因与免疫佐剂联合表达的文献报道.该实验中,我们首次将P30及霍乱毒素A<,2>/B的融合蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中成功地表达,此项研究国内外均未见报道.该课题根据已发表的弓形虫P30和霍乱毒素A<,2>/B的基因序列,自行设计合成两对引物,在引物的5末端适当的位置分别加上合适的限制性内切酶酶切位点,采用分子生物学定向克隆的方法,在保证其开放读码框均正确的前提下,使CTX 关于弓形虫亚单位疫苗的研制国内大多停留在P30单价亚单位疫苗上,目前国内外均未见P30基因与免疫佐剂联合表达的文献报道.该实验中,我们首次将P30及霍乱毒素A<,2>/B的融合蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中成功地表达,此项研究国内外均未见报道.该课题根据已发表的弓形虫P30和霍乱毒素A<,2>/B的基因序列,自行设计合成两对引物,在引物的5末端适当的位置分别加上合适的限制性内切酶酶切位点,采用分子生物学定向克隆的方法,在保证其开放读码框均正确的前提下,使CTX A<,2>/B基因可以定向克隆在P30基因的后面,成功构建了含复合基因的克隆质粒(pUC18-P30-CTX A<,2>/B)及表达质粒(pFastBacHTa-P30-CTX A<,2>/B),并在昆虫细胞Sf9中成功表达了P30-CTX A<,2>/B复合基因的融合蛋白,表达产物行SDS-PAGE蛋白电泳显示一条分子量大小为62Kda的蛋白条带,经Western-Blotting检测进一步证实该条带为含P30的特异性融合蛋白.该实验构建的表达载体在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中成功的表达了特异性的融合抗原蛋白P30-CTXA<,2>/B,为今后的动物实验乃至人体试验奠定了基础,为弓形虫疫苗的研制提供了亚单位复合基因的候选成份,应用前景广阔.
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