溴隐亭(Bromocriptine, BC)耐药是垂体泌乳素腺瘤药物治疗无效或复发的关键因素,探索垂体泌乳素腺瘤对药物BC产生耐药性的原因并对耐药垂体泌乳素腺瘤患者进行准确诊断有利于实施个体化治疗,提高治疗效果。本论文首先采用高效液相色谱(HPLC)与串联质谱(MS/MS)联用技术,建立了灵敏、快速的适用于临床垂体泌乳素腺瘤患者的血浆和肿瘤组织中药物BC的定量分析方法。采用该方法比较分析了耐药型与敏感型垂体泌乳素腺瘤患者的血浆及肿瘤组织中药物BC的分布差异,发现药物BC在耐药患者体内也能够被有效地吸收和转运至肿瘤组织,在肿瘤组织中维持较高的含量,耐药型垂体泌乳素腺瘤患者经BC治疗无效的原因可能是肿瘤细胞自身对药物产生的耐药性。在上述研究基础上,进一步采用基于LC-MS/MS技术的代谢组学方法,分别以临床垂体泌乳素腺瘤患者的血浆和大鼠垂体泌乳素腺瘤细胞为研究对象,开展了垂体泌乳素腺瘤药物BC的耐药性研究。筛选出一批与耐药相关的潜在生物标志物,并利用发现的生物标志物进行了代谢通路分析,在BC耐药垂体泌乳素腺瘤患者和耐药肿瘤细胞中发现了与耐药相关的发生紊乱的代谢通路。本研究结果为临床BC耐药垂体泌乳素腺瘤的耐药性机制提供了分子基础及重要依据。本论文的研究内容主要包括以下三个部分：1.临床患者血浆及垂体泌乳素腺瘤组织中药物溴隐亭的定量分析采用LC-MS/MS技术,通过对色谱条件和MRM检测模式下质谱参数的系统优化,建立了灵敏、快速、专属性强,适用于临床人体血浆和肿瘤组织中药物BC的定量分析方法。采用该方法对耐药型和敏感型垂体泌乳素腺瘤患者的血浆及肿瘤组织中药物BC进行了定量分析,发现耐药患者口服BC 2,4和6h后,体内血浆药物浓度明显高于敏感患者；服药3个月后的耐药患者肿瘤组织中的BC浓度也明显高于敏感患者,表明BC在耐药患者体内也能够被有效地吸收,并能够被有效地从血浆转运至肿瘤组织,在肿瘤组织中维持较高的药物含量。本研究显示肿瘤细胞自身对药物BC产生的抵抗可能是导致耐药型垂体泌乳素腺瘤患者经药物BC治疗无效的原因。2.溴隐亭耐药垂体泌乳素腺瘤的血浆代谢组学研究采用正、负离子检测模式相结合的LC-MS/MS分析方法,对BC耐药型和敏感型垂体泌乳素腺瘤患者的血浆样本进行了代谢组学分析。最终在耐药患者和敏感患者的血浆中发现了64个具有显著性差异的代谢物,即潜在耐药标志物。进一步通过高分辨率MS谱及MS/MS谱分析,结合同位素丰度比、氮规则,以及网络数据库检索和标准品对比等分析手段与步骤对这些潜在耐药标志物的结构进行了分析鉴定。目前,共鉴定出21个潜在耐药标志物的结构,包括氨基酸、鞘脂、脂肪酸类等代谢物,其中1-磷酸二氢鞘氨醇、C16鞘氨醇、1-脱氧C14二氢鞘氨醇等9个潜在耐药标志物具有较高的诊断准确性(AUC>0.9)。进一步对这些潜在耐药标志物进行了代谢通路分析,发现与BC敏感型垂体泌乳素腺瘤患者相比,耐药患者体内鞘脂类代谢,赖氨酸生物合成,氨酰tRNA生物合成,丙氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸代谢,赖氨酸降解等多条代谢通路发生紊乱。3.溴隐亭耐药垂体泌乳素腺瘤的细胞代谢组学研究以大鼠垂体泌乳素腺瘤耐药型GH3细胞及敏感型MMQ细胞为研究对象,开展了药物BC耐药垂体泌乳素腺瘤的细胞代谢组学研究。首先,在细胞样品前处理的过程中,采用液氮冷冻法对细胞进行淬灭,并分别采用甲醇、甲醇、水对细胞样品进行3次提取。在此基础上,对细胞数目和复溶溶剂进行了考察,最终确定细胞样品中的细胞数目应≥5×106个,以80%甲醇水作为复溶溶剂,优化了垂体泌乳素腺瘤细胞的代谢组学样品前处理方法。其次,采用酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)对药物BC作用不同时间后MMQ和GH3细胞培养基中的泌乳素(Prolactin, PRL)进行了检测,考察了耐药型GH3细胞经BC作用后PRL水平的变化,并比较分析了药物BC对两种细胞PRL分泌的抑制效果,为潜在耐药标志物的筛选提供了依据。进一步采用与血浆代谢组学相同的分析方法,对未经药物BC作用的MMQ和GH3细胞开展了代谢组学分析,通过多变量统计分析和相关性分析,发现了60个与耐药相关的潜在生物标志物,并鉴定出24个潜在耐药标志物的结构,其中包括胆碱、氨基酸、肉碱、核苷类等代谢物。代谢通路分析表明,与BC敏感型垂体泌乳素腺瘤细胞相比,耐药肿瘤细胞中甘油磷脂代谢,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸生物合成,磷酸肌醇代谢,谷胱甘肽代谢等多条代谢通路发生紊乱。其中,甘油磷脂代谢,泛酸酯和辅酶A生物合成,半胱氨酸和蛋氨酸代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,氨酰tRNA生物合成等5条代谢通路在耐药垂体泌乳素腺瘤患者和耐药肿瘤细胞中同时发生紊乱。